來源：來源網絡 2006-12-10 21:02
操作注意事項：
由於RNA酶的廣泛存在與難以滅活的頑固特性。使得RNA的提取純化和後續工作變得非常困難。為了保證RNA的研究工作成功，請仔細閱讀下列注意事項，相信它能幫助您解決常見的問題。
歸根究底，RNA工作的主要問題是防止RNA酶的汙染。RNA酶無處不在，在實驗操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不當操作都有可能造成RNA酶汙染，從而導致整個實驗失敗。因此，嚴格控制實驗條件，避免任何可能的汙染是保證實驗成功的關鍵，必須做到以下幾點：
1.如果可能，實驗室應闢出專門RNA操作區，離心機、移液槍、試劑等均應專用。RNA操作區應保持清潔，並定期進行消毒。
2.操作過程中應自始至終佩戴拋棄式橡膠或乳膠手套，並經常更換，以避免將手、臂上的細菌和真菌以及人體自身分泌的RNA酶帶入試管或汙染用具。儘量避免使用拋棄式塑料手套。塑料手套不貼身，常常造成操作不便，而且多出部分還容易在器具上遭RNA酶汙染並向未汙染處傳遞，擴大汙染。
3.儘量使用一次性槍頭、離心管等塑料製品，儘量避免與其它實驗共享器具，以防止交叉汙染。推薦使用出廠前已經滅菌的槍頭和離心管，大多國外廠商供應的無菌塑料製品很少有RNA酶汙染，買來後可直接用於RNA操作。許多研究者用DEPC等處理的塑料製品，往往由於二次汙染而帶有RNA酶，從而導致實驗失敗。
4.配製溶液用的酒精，異丙醇、Tris等應採用未開封的新品。溶液需用DEPC水配製（加0.01%(體積比)DEPC至重蒸水或Mili Q級水中，處理過夜，滅菌即成DEPC水）。
5.所有玻璃製品都必須在240℃烘烤4小時。所有舊塑料製品都必須用0.5M的NaOH處理10分鐘，並用DEPC-H2O徹底衝洗後滅菌，也可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然後滅菌，烘乾。無法用DEPC處理的用具可以用氯仿擦拭若干次，這樣通常可以消除RNA酶的活性。
樣本保存的注意事項：
樣本一旦從生物體中分離後，細胞內的RNA就變得非常不穩定，容易降解。因此取樣後，如何保證取樣前後基因的表達模式不變，就變得非常重要。傳統方法是用液氮速凍，再放到超低溫冰箱中保存。
目前有些廠家開發出專門的RNA保護劑，如Qiagen公司的RNAlater是具有抑制RNase和穩定RNA作用的試劑，將採集的組織樣本等直接放入到RNAlater中，即可起到穩定樣本中RNA的作用。無需液氮或乾冰，方便安全地在室溫下保存一段時間，低溫可長期保存。還有對細菌樣本專用的RNAprotect Bacteria Reagent及對血液樣本專用的PAXgene™ Blood RNA System。
RNA的定量與純度：
RNA通常用分光光度計定量，測量在260 nm處的吸收值（A260）。通常分光光度計A260的讀數要介於0.15-1.0之間才是可靠的，因此RNA提取結束後，要根據大概產量稀釋（推薦用10 mM Tris.HCl, pH 7.0稀釋）到適當濃度範圍，再用分光光度計測量。A260為1相當於RNA的濃度為40 µg/ml。
為了檢測RNA的純度，可以測量A260與A280的比值，通常純RNA的A260/A280為1.9-2.1。
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