病毒核酸檢測流程

病毒核酸實驗室檢測步驟

具體操作如下：

1. 病毒採樣：取病人唾液或者鼻咽拭子於病毒採樣管保存

2. 　核酸提取：提取病人唾液或者鼻咽拭子樣本裡的遺傳物質，如果病人攜帶病毒，則樣本裡就會有該病毒的遺傳物質RNA,使用矽膠柱離心、磁性矽膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-70℃或液氮保存。

3.逆轉錄合成cDNA:進行提取液中RNA的逆轉錄，把RNA逆轉錄成cDNA

　　逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩衝液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩衝液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。

3. PCR擴增反應（使用二次擴增的套式PCR擴增方法）:用病毒cDNA的特異性引物進行PCR擴增

PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩衝液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板（DNA或cDNA）。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。使用二次擴增的套式PCR擴增方法。

5. 結果分析判定：

若有擴增出病毒的DNA條帶，則判定病人體內有該病毒

若沒有擴增出DNA條帶，則判定病所取樣本無該病毒

實驗注意事項：

①　每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。

②　核酸檢測陽性：發現核酸陽性反應，應該重複採集樣品進行複測，複測結果呈核酸陽性反應則判定為核酸陽性，複測結果為核酸陰性反應則判為不確定結果，需進一步隨訪檢測。

③　核酸檢測陰性：只可報告本次實驗結果陰性。