色譜分析常用定量方法

2021-02-08 藥事縱橫

色譜定量分析,顧名思義就是色譜分析方法來測定組分的含量,主要分為面積百分比法、歸一化法、外標法、內標法和標準加入法,色譜定量分析首先需要明確的概念是響應因子,不同的化合物在檢測器的響應是不一樣的,簡單地舉個例子說,相同濃度的化合物A和B,相同的進樣量,得到的峰高和峰面積不一定一樣的,響應因子的計算式如下:


式中,w為化合物的含量,A為響應值,一般為峰面積或峰高,本文以峰面積為例。由於不同的化合物在同一個檢測器的響應因子不同,甚至同一個化合物不同濃度在同一檢測器的響應因子不同,簡單地說就是化合物在檢測器的響應不呈線性,或者線性範圍比較窄。選擇合適的定量方法時,除需要考慮是相對定量還是絕對定量外,同時需要考察化合物的線性響應範圍、是否有合適內標、是否有標準品等。本文簡單介紹下色譜分析中常用的一些定量方法。

1.      歸一化法:

把所有出峰的組分含量之和按100%計算的定量方法,其中組分i的質量分數可按下式計算:


式中,f為響應因子,A為峰面積,w為含量

歸一化法屬於相對定量,優點是簡便、準確,進樣量、流速、柱溫等操作條件對定量結果的影響小,但要求所有組分都流出色譜柱,並被檢測器檢出,同時需要測定各個組分的響應因子,而各個組分的響應因子的測定都需要基準物質,所以使用受到限制。歸一化法主要用於GC,因為GC的一些檢測器如FID對某些組分的響應因子相近或有一定的規律,可以在文獻上查到,當響應因子相近時,可以直接用面積歸一化法。

2.峰面積百分比法:

峰面積百分比法也是相對定量,忽略各個組分的響應因子或者默認為每個組分的響應因子相同,計算如下式:


峰面積百分比法適合於不需要準確定量,同時難以得到響應因子的情況。

3.外標法:

外標法有標準曲線和單點外標法,標準曲線法是用標準品配製一系列濃度的標準溶液樣品,通過不同濃度的標準溶液及其對應響應值,繪製樣品濃度和響應值關係曲線:


將待測組分的響應值帶入工作曲線可以計算組分的含量。

單點外標也叫標準品比對法,是將原點和標準溶液的數據連成一條直線,如下式的計算:


式中,Ci為待測組分含量,Ai為待測組分的峰面積,Astd為標準溶液中標準物的峰面積,Cstd為標準溶液濃度。

外標法屬於絕對定量,繪製好標準曲線後,測定該組分的峰面積或峰高后,代入標準曲線就可以計算得到含量,待測組分含量應該是在標準曲線濃度範圍內的,HPLC定量比較多使用外標法,外標法需要每次樣品分析的色譜條件儘量一致,否則需要重新測定標準曲線樣品得到新的標準曲線。一般一個分析批至少需要一條標準曲線,生物樣品分析時除需要考察標準曲線線性範圍、分析準確度和精密度外,還需要考察一個分析批能夠耐受的樣品數量,即在一個分析批內多少樣品數量範圍內定量是準確的。

4.內標法:

內標法是選擇合適的化合物作為待測組分的參比物,定量地加到樣品中,根據待測組分和內標的響應值(峰面積或峰高)之比,以及內標物的含量來計算待測組分的含量。


式中,fi和fIS分別為待測組分和內標的響應因子,Ai和AIS為待測組分和內標的響應值,wi和wIS分別為待測組分含量和內標含量。

這種方法需要測定待測物和內標物的響應因子,常用於GC中。另一種內標比對法是常用於LCMS/MS中,內標比對法是在不知道響應因子的情況下的一種內標法,先將一定量的內標物加入到標準物溶液中,再將相同量的內標加入到待測溶液中,分別進樣,按下式計算待測組分含量:


式中,Ci為待測組分含量,Ai為待測組分的峰面積,Astd為標準溶液中標準物的峰面積,Cstd為標準溶液濃度,AIS為內標的峰面積。。

內標物的選擇是內標法的關鍵,內標物應滿足以下幾點:

內標法的優點是:進樣量的變化,色譜條件的微小變化對定量結果的影響不大,同時也可以校正樣品前處理(提取、濃縮、衍生化等)過程中樣品的損失。如果可以選擇合適的內標,內標法定量的準確度和精密度是優於外標法的。

5.標準加入法:

標準加入法實質上是一種特殊的內標法,是以待測組分的純物質作為內標,加入到待測樣品中,然後在相同的色譜條件下,測定加入前後待測組分的峰面積(或峰高),從而計算出樣品中待測組分的含量。以峰面積計算方法為例,標準加入法的計算如下:


式中,Δwi為加入的標準品的量,Ai為待測組分的峰面積,ΔAi為加入標準品後待測組分峰面積的增加量,wi為原樣品中待測組分的含量。


藥事縱橫是一個開放,由自願者組成的團體,由以下成員組成:Voyager88,雷道安,Herman,梅希,文竹,duke,佔小兵,子炎,ZMJ,潤兒,貝殼裡的乾坤,曾文亮和雷陣雨。歡迎有志之士加入我們團隊。投稿、合作、加專業群請加微信437180999,藥事縱橫二千人QQ群22711679


聲明:藥事縱橫的所有原創文章都已經支付了稿費,在未獲授權的條件下,任何單位及個人不得私自抓取藥事縱橫的文章或數據到其它任何網站或媒體,否則一律視為惡意侵權,如獲授權轉載,請務必註明作者和來源。


相關焦點

  • 高效液相色譜的定性定量分析 EWG1990儀器學習網
    2019-07-11作者:EWG1990儀器學習網一、定性分析在高效液相色譜中,常用的定性分析有下列五種方法更多的儀器學習資料,在儀器學習網3、收集柱後流出組分,再用其他化學或物理方法定性液相色譜常用化學檢測器,被測物經過檢測器後不受破壞,所以可以收集各組分,然後再用紅外光譜、質譜、核磁共振等方法進行鑑定。
  • 色譜分析知識匯總
    今天推送的主題是:色譜分析的相關內容。讓我們一起來看看吧!一  緒論二   經典柱層析三   平面色譜法四   氣相色譜法五   高效液相色譜法下面,讓我們開始吧!(一)概述混合物最有效的分離、分析方法。
  • 【盤點】常用的VOCs的定性和定量檢測技術
    氣相色譜技術GC和GC-MS  氣相色譜法是最常用的一種儀器,它具有高效能、高選擇性、高靈敏度、分析速度快和應用範圍廣等優點,尤其對異構體和多組分混合物的定性、定量分析更具有優勢。通常與氣相色譜聯用進行VOCs分析的檢測器有:氫火焰離子檢測器(FID)(一種通用型檢測器,也是氣相色譜中最常用的檢測器之一)、電子捕獲檢測器(ECD)(滷代烴和烷基硝酸鹽的檢測)、質譜檢測器(MS)和光離子化檢測器(PID)。
  • 盤點常用的VOCs的定性和定量檢測技術
    筆者對空氣中揮發性有機物(VOC)的檢測方法進行了分析,比較了氣相色譜法、高效液相色譜法、膜技術處理、化學法和在線檢測試驗艙等檢測方法的差異性。VOCs檢測技術的日新月益對VOCs的檢測、監控、減排有很大的促進作用。本次為您介紹常用的VOCs檢測技術。
  • 科學家開發出新型定量蛋白質組學分析方法
    科學家開發出新型定量蛋白質組學分析方法 作者:小柯機器人 發布時間:2020/11/26 11:45:11 美國威斯康星大學麥迪遜分校Joshua J. Coon、Jesse G.
  • 手性化合物色譜分析方法開發(五)
    下面主要介紹色譜柱的柱溫,正相體系中的痕量水,HPLC操作模式(等度洗脫模式或者梯度洗脫模式)對於手性化合物手性分析方法的影響。如我們所知,溫度在HPLC方法開發中佔據舉足輕重的地位,在範式方程中表達為傳質阻力項,溫度越高,對於流動相而言其粘度越小(如下表乙醇的粘度隨溫度的變化),而儀器背壓也就越低。
  • 質譜分析水楊酸(SA)中葡萄糖醛酸代謝產物定量方法開發的思考
    ,其它的代謝物均完成了定量分析,但在葡萄糖醛酸代謝產物的定量上遇到了一些困難,現就對其方法開發中需要注意的問題跟大家分享下:藥物的葡萄糖醛酸代謝產物有2個SAAG與SAG,為同分異構體。代謝途徑與結構式如下:(藥物不是水楊酸,SA只是其中的一個代謝產物)方法1:間接定量(酶解法),用葡萄糖醛酸酶水解後,對SA進行定量分析①酶的來源,不同來源具有不同的酶解活性和最近工作PH②酶解的環境,不同PH環境中,酶的活性不一樣③酶解的時間,④酶的濃度,酶加入量的多少,決定了酶解的完全程度方法2:直接定量,分別直接對SAAG與SAG
  • 液相色譜的定性方法 EWG1990儀器學習網
    2019/01/11作者/EWG1990儀器學習網液相色譜法作為一種重要的分離分析手段,具有能通過色譜柱分離複雜樣品中不組分的能力,這種能力是任何其他分析方法所無法比擬的。對色譜柱分離後的組分進行。儘管液相色譜法包多定性及定量鑑定,是色譜工作者完成分析工作的一個重要環節。
  • 【科研方法】質譜定性與定量分析方法全解析
    因此,在進行質譜分析前,要根據樣品狀況和分析要求選擇合適的質譜儀。目前,有機質譜儀主要有兩大類:氣相色譜-質譜聯用儀與液相色譜-質譜聯用儀。今天小編主要從以下三個部分給大家科普一下質譜分析方法的基礎知識:一. 質譜基礎及相關術語二. 定性(確證)方法三.
  • LC-MS/MS定量分析的四步走
    今天的重點是幫您整理一下LC-MS/MS定量分析的思路,與網友踩坑之後的的一些經驗。速速收藏吧~歡迎在文底留言,聊聊你在分析時踩過的坑!● 色譜柱長度可根據分離的要求而定,定性可長些,定量在能有效排除幹擾情況下儘量短,提高效率;內徑最好選細徑柱如2mm的,1mm的,IS可不分流, 4.6mm柱用1ml流量時如不分流靈敏度還不是最佳,不如流量低時更好。
  • 相比於氣相色譜,液相色譜有什麼特點呢?
    那麼,氣相色譜與液相色譜相比有什麼特點呢?可以從以下幾個方面進行比較:流動相:氣相色譜用氣體作為流動相,又稱為載氣。常用的載氣有氦氣、氮氣和氫氣。與高效液相色譜相比,氣相色譜流動相的種類較少,選擇範圍小。載氣的主要功能是將樣品帶入氣相色譜系統進行分離,其本身對分離效果的影響是非常有限的。
  • 高效液相色譜儀定性定量分析和提純精製的通用規則
    3.18、分級:通過色譜柱分離和洗脫取得分析物的操作。3.19、流分:通過分級操作分離得到的溶液。3.20、方法確認:證明使用高效液相色譜儀的分析方法適合分析目的的各種測試。4、高效液相色譜儀概述4.1、液相色譜法(LC)是一種具有下述特徵的物理和化學分離分析方法。它使用液體作為流動相,每種分析物在色譜柱的固定相和流動相問的相互作用存在差別,這種差別被利用來分離混合物 。流動相被加壓傳送以取得短時問內的高效分離的液相色譜分析方法被稱為高效液相色譜法(H PLC)。
  • 優級純、分析純、色譜純、色譜試劑的區別
    分析純:是指做分析測定用的試劑,雜質更少,不妨礙分析測定。色譜純:色譜純試劑是在最高靈敏度下以10-10克下無雜質峰來表示的。是指進行色譜分析時使用的標準試劑,在色譜條件下只出現指定化合物的峰,不出現雜質峰。實驗純:代號LP,一般使用黃標籤,純度較差,雜質含量不做選擇,只適用於一般化學實驗和合成製備。
  • 賽默飛OLED材料分析之必備的液相色譜和色譜數據系統
    01、小分子發光材料以有機小分子金屬螯合物和稀土配合物為代表,常用金屬離子包括鋁、銥和鉑等元素,常用配體有席夫鹼類和羥基喹啉類材料。02、聚合物發光材料主要包括聚苯撐乙烯類(PPV)材料、聚咔唑類材料以及聚芴類(PF)材料等。
  • 氣相色譜基礎知識詳解
    作用:是將液體或固體試樣,在進入色譜柱之前瞬間氣化,然後快速定量地轉入到色譜柱中。進樣的多少,進樣時間的長短,試樣的氣化速度等都會影響色譜的分離效果和分析結果的準確性和重現性。 2.1 進樣器液體樣品的進樣一般採用微量注射器。
  • 質譜分析在化學分析中的應用
    用上述方法進行多組分分析時費時費力且易引入計算及測量誤差,故現在一般採用將複雜組分分離後再引入質譜儀中進行分析,常用的分離方法是色譜法。(1) 氣相色譜/質譜聯用(GC-MS)定量分析由 GC-MS 得到的總離子色譜圖或質量色譜圖,其色譜峰面積與相應組分的含量成正比,若對某一組份進行定量測定,可以採用色譜分析法中的歸一化法、外標法、內標法等不同方法進行。這時,GC-MS 法可以理解為將質譜儀作為色譜儀的檢測器。其餘均與色譜法相同。
  • 質譜分析方法最全解析...
    目前,有機質譜儀主要有兩大類:氣相色譜-質譜聯用儀與液相色譜-質譜聯用儀,現就這兩類儀器的分析方法敘述如下: 在GC-MS分析中,色譜的分離與質譜數據的採集同時進行,為了使每個組分都得到分離和鑑定,必須設備合適的色譜和質譜分析條件: 色譜條件包括色譜柱類型(
  • 分析方法驗證那些事!
    含量測定和雜質檢測:對於色譜方法來說,應當用具有代表性的色譜圖來證明專屬性並在圖上適當地標出每一種成分,其他分離技術也應當有相似的考慮。應當在適合的程度上研究關鍵的色譜分離度。對於關鍵的分離度,能夠通過兩個洗脫最靠近的化合物之間的解析度來證明方法的專屬性。
  • 液相色譜市場估算 2019年規模預計超30億美元
    其中,涉及化妝品相關檢測的標準有12條,此外還包括多條有關礦石、石墨烯、染料等材料的分析檢測標準。檢測方法涉及高效液相色譜法、高效液相色譜-電感耦合等離子質譜法、液相色譜-串聯質譜法等多種氣相色譜儀器分析方法。  圖為液相半製備色譜儀  高效液相色譜法(HPLC)是繼氣相色譜之後,70年代初期發展起來的一種以液體做流動相的新色譜技術。
  • 奶粉中碘檢測的氣相色譜測定方法
    色譜柱:長l8m,內徑為3II31TI的螺旋型玻璃柱。固定相:5%sE一30 2%0V210固定液的0∞一mosobWAWDines擔體舯一100目。操作溫度:鎳源鑑定器溫度為255℃,汽化溫度220oC,柱溫90℃。載氣:高純氮氣(99.99%),流速90nd·min~。  2試劑(1)碘標準儲存液:稱取優級純碘化鉀0.1308g溶於去離子水中.並稀釋至1000ml。