分子生物學實驗室必備儀器(二十)--凝膠成像系統

2021-02-19 實驗室商城

        凝膠成像系統:對蛋白質或核酸凝膠進行觀察、成像的實驗儀器,並可進行分子量計算、含量計算、密度分析等半定量分析。 

        凝膠成像系統是通過紫外或白光光源對樣品進行光激發,由科學級CCD相機和專業的大光圈鏡頭對樣品所發射的光通過特定波長濾光片後進行捕捉,從而進行成像。 凝膠成像主要可應用於蛋白質、核酸等生物大分子的分離純化結果作定性分析以及其他紫外或白光激發的樣品分析(如菌落計數、抑菌圈測量、抗生素效價測定、點雜交分析、微孔板分析等)。

        總體上來說凝膠成像可應用於:凝膠成像系統可以用於:蛋白質、核酸、多肽、胺基酸、多聚胺基酸等其他生物分子的分離純化結果作定性分析。 

(1)分子量定量 

對於一般常用的DNA膠片,利用分子量定量功能,通過對膠上DNA Marker條帶的已知分子量注釋,自動生成擬合曲線,並以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結果較肉眼觀察估計要準確很多。 

(2)密度定量 

一般常用的測定DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區分各個長度片段的濃度。利用凝膠成像系統和軟體,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標準條帶進行密度標定以後,可以方便的單擊其他未知條帶,根據與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量。此方法也適用於對PA GE蛋白膠條帶的濃度測定。 

(3)密度掃描 

在分子生物學和生物工程研究中,最常用到的是對蛋白表達產物佔整個菌體蛋白的百分含量的計算。傳統的方法是利用專用的密度掃描,但利用生物分析軟體結合現在實驗室常規配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像就能完成此項工作。 

(4)PCR定量 

PCR定量主要是指,如果PCR實驗擴增出來的條帶不是一條,那麼可以利用軟體計算出各個條帶佔總體條帶的相對百分數。就此功能而言,與密度掃描類似,但實際在原理上並不相同。PCR定量是對選定的幾條帶進行相對密度定量並計算其佔總和的百分數,密度掃描時並對選擇區域生成縱向掃描曲線圖並積分。

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