1.什麼是化學發光免疫分析技術?
化學發光免疫分析 ( Chemiluminescence immunoassay, CLIA) 包括兩個部分,即高靈敏的化學發光檢測和高特異性的免疫反應,其基本原理是免疫反應中的酶作用於發光底物,使之發生化學反應並釋放出大量的能量,產生激發態的中間體。這種激發態中間體回到穩定的基態時,可同時發射出光子。利用發光信號測量儀器即可測量出光量子產額,該光量子產額與樣品中的待測物質的量成正比,由此可以建立標準曲線並計算樣品中待測物質的含量。CLIA可用於檢測各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、 維生素和藥物等,是繼放射免疫分析、酶聯免疫分析、螢光免疫分析和時間分辨螢光免疫分析之後發展起來的一項最新免疫測定技術。
2.化學發光免疫分析法有哪些類型?
化學發光免疫分析 ( Chemiluminescence immunoassay, CLIA) 按照發光劑的不同分為三種類型:直接化學發光免疫分析、酶促化學發光免疫分析、電化學發光免疫分析。其中直接化學發光免疫分析包括吖啶酯系統和草酸酯系統;酶促化學發光免疫分析包括辣根過氧化物酶-魯米諾(HRP-Luminol)系統、鹼性磷酸酶(AP-AMPPD)系統、黃嘌呤氧化酶系統;電化學發光免疫分析包括三聯吡啶釕-三丙胺系統。
3.什麼是直接化學發光分析法?
直接化學發光分析法是指吖啶酯直接標記抗體(抗原),與待測標本中相應的抗原(抗體)發生免疫反應後,形成固相包被抗體-待測抗原-吖啶酯標記抗體複合物,這時只需加入氧化劑(H2O2)和NaOH使成鹼性環境,吖啶酯在不需要酶的催化作用下直接分解、發光 ,然後由集光器和光電倍增管接收、記錄單位時間內所產生的光子能,這部分光的積分與待測抗原的量成正比,可從標準曲線上計算出待測抗原的含量。小艾為您推薦進口高品質直接化學發光劑吖啶酯Lumiwox™ acridinium NHS ester(貨號#26000)和過氧化氫ReadiUse™ hydrogen peroxide solution *50 mM calibrated and stabilized solution*(貨號#11004)
4.什麼是酶促化學發光免疫分析法?
化學發光酶免疫分析(Chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA)是用參與催化某一化學發光反應的酶如辣根過氧化物酶(HRP)或鹼性磷酸酶(ALP)來標記抗原或抗體,在與待測標本中相應的抗原(抗體)發生免疫反應後,形成固相包被抗體-待測抗原-酶標記抗體複合物,經洗滌後,加入底物(發光劑),酶催化和分解底物發光,由光量子閱讀系統接收,光電倍增管將光信號轉變為電信號並加以放大,再把它們傳送至計算機數據處理系統,計算出測定物的濃度。
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5.什麼是辣根過氧化物酶化學發光免疫分析法?
辣根過氧化物酶-魯米諾免疫分析系統採用辣根過氧化物酶(HRP)標記抗體(或抗原),在與反應體系中的待測標本和固相載體發生免疫反應後,形成固相包被抗體-待測抗原-酶(HRP)標記抗體複合物,這時加入魯米諾發光劑、H2O2和化學發光增強劑使產生化學發光。
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6.為什麼HRP可以作為酶報告系統被廣泛使用?
HRP可以作為酶報告系統被廣泛使用,主要是因為三個因素:首先,HRP能夠放大微弱信號,增強對低豐度靶分子的檢測能力。其次,HRP (~44 kDa)相對於其他報告酶(如鹼性磷酸酶(~140 kDa))的體積較小,進一步提高了細胞內對樣品的滲透,減少了空間位阻,使免疫反應性損失最小化。第三,HRP的高周轉率和良好的穩定性,使其能夠產生快速而強的信號。
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7.什麼是電化學發光免疫分析法?
電化學發光免疫測定技術(electro-chemiluminescence immunoassay, ECLIA)電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物;在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應,用電化學發光劑三聯吡啶釕[Ru(bpy)3]2+標記抗體,通過抗原-抗體反應和磁珠分離技術,根據三聯吡啶釕在電極上發出的光強度對待測的Ag或Ab進行定量/定性。
ECLIA是目前最先進的標記免疫測定技術之一,是繼EIA、RIA、FIA、時間分辨螢光免疫技術(TRFIA)之後的新一代標記免疫測定技術。
文章來源:每日生物評論
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