細胞生長曲線測定,這些問題你遇到過麼?
下圖是一個典型的細胞生長曲線圖
細胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK8,MTT等方法。其中測定細胞生長曲線是檢測細胞絕對生長數的常用方法,也是判定細胞活力的重要指標,是細胞生物學特性的基本參數之一。因為細胞太小,無法測單個細胞的生長狀態,所以測細胞群體的生長曲線。
在做細胞生長曲線測定過程中,我們經常遇到以下幾個問題:
1、如何選擇細胞接種數?
答:可根據細胞傳代培養過程中接種數及細胞生長周期進行計算,細胞接種數因細胞的不同而不同。
2、細胞生長曲線測定時為什麼要做重複孔?
答:測定細胞生長曲線細胞計數時選擇 3 個復孔,每孔分別計三次,取其平均值,目的是減小操作誤差。
3、細胞生長曲線測定周期是幾天?
答:一般是一個星期。
4、為什麼繪製的細胞生長曲線沒有達到平臺期?
答:可能有以下原因:一是細胞接種密度過低;二是細胞培養時間過短;三是細胞生長狀態不好,使其不能正常增殖。
5、為什麼細胞計數第一天,細胞數沒有增加反而減少?
答:一般細胞傳代後,會有一個生長緩慢的潛伏期,細胞不增殖,而細胞會有正常的死亡,故細胞數不增加反而減少。
6、細胞生長曲線還有其他方法繪製嗎?
答:當然有。我們提到最多的是直接計數的方法,除此以外還有相對計數的方法,該類方法首先要繪製標準曲線,標定細胞數和某個變量的函數關係,然後我們只需要測定每天這個變量的值便可以計算出細胞數。常用的是 MTT、CCK8 等比色的方法
實驗室細胞培養
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振蕩器在培養箱中的擺放位置
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CELLine二室技術示意圖
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