分子克隆的正確打開方式 | 培養基專題(一)

2021-02-23 醫學方

這樣美麗的作圖，你能猜想到是怎樣做出來的嗎?其實這是一種微生物的培養皿。有些微生物呈現不同的顏色，如金黃色葡萄球菌為粉紅色或者綠色，銅綠假單胞菌為綠色，大腸桿菌為黃色等等。通過在固體培養基上培養不同的菌落而作圖。微生物培養是科研中必不可少的一部分，尤其在進行分子克隆實驗中，常用的質粒轉化實驗便是藉助感受態的大腸桿菌獲得多拷貝的質粒，為下一步的研究奠定基礎。

接下來的時間裡，小編會為大家陸續介紹分子克隆的相關知識。

今天為大家介紹下分子克隆的必備液體-LB培養基，又可分為LB肉湯培養基以及LB固體培養基。

LB肉湯培養基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養基，有時又稱為普通培養基。生化分子實驗中一般用LB培養基來預培養菌種，使菌種成倍擴增，達到使用要求。可分為液體培養基和固體培養基。

5g 酵母提取物Yeast extract

10g 胰蛋白腖Tryptone

10g 氯化鈉NaCl

其中酵母提取物為微生物提供碳源和能源，磷酸鹽、蛋白腖主要提供氮源，而NaCl提供無機鹽。目前LB肉湯培養基即可以單獨購買試劑，也可選擇購買商品化三合一試劑進行配置。

配製方法

首先加入單蒸水，用玻璃棒攪拌溶解，然後再定容至1000ml。配置好的LB肉湯培養基分裝入錐形瓶，用封口紙封好後進行高壓滅菌20min。或者直接將其分裝至搖菌管中滅菌，以便下一步的搖菌實驗。

注意事項:

在配製固體培養基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑，通常不被微生物分解利用。固態培養基配製時則按100mlLB培養基加入1.5g瓊脂粉的比例進行配置，搖勻後同樣進行高壓滅菌20min。

取出平板，標好平板抗生素名稱，如氨苄黴素AMP+，或者卡那黴素KANA+，一般氨苄黴素AMP+為100ug/ml LB固體培養基;卡那黴素則為50ug/ml LB固體培養基。標好平板之後，可將其至於超淨臺內，打開超淨臺紫外線，進行紫外滅菌20min.

LB固體培養基高壓滅菌後，將融化的LB固體培養基置與室溫進行降溫，一般降至手可觸摸時，加入氨苄抗生素，並充分搖勻。注意溫度過高導致抗生素失效。  

倒板時，一般15-20ml倒1個板子。抗生素平板可適當倒厚點。 

倒好的平板一般置於超淨臺內待其自然降溫，凝固。然後用封口膜封邊，並倒置放於4℃保存，儘量在一個月內使用。

「醫學方」始終致力於服務「醫學人」，將最前沿、最有價值的臨床、科研原創文章推送給各位臨床醫師、科研人員

醫學方已推出「實驗室那些事兒」「SCI寫作技巧」「文獻精讀與解析」「醫學英語輕鬆學」「國自然基金申請」「臨床數據挖掘」、「基因數據挖掘」、「R語言教程」、「醫學統計學」、「微創動物實驗培訓」等多個專題課程，如需了解課程詳細推文，可關注「醫學方」公眾號，點擊「精品專題」進入

騰訊課堂：https://medfun.ke.qq.com

網易雲課堂：http://study.163.com/u/ykt1467466791112

客服電話：15821255568

客服微信：yixuefang1234

溫馨提示：醫學方還設有專門的討論群哦~各位明星導師都在群中，可以解答各位的遇到的問題，如有興趣，可以加客服微信後加入群聊...

相關焦點

  • 選修一:LB培養基和MS培養基的比較
    LB一般被解釋為Luria-Bertani培養基，根據其發明人貝爾塔尼（Giuseppe Bertani）的說法，這個名字來源於英語的lysogeny broth，即溶菌肉湯。1．用途一般用該培養基來預培養菌種，使菌種成倍擴增，達到使用要求，可分為液體培養基和固體培養基。
  • 分子克隆的常用載體
    分子克隆的常用載體 來源：來源網絡 2006-12-27 22:54 DNA片段的克隆需要合適的載體
  • 細胞培養基的使用方法
  • 【高中生物】專題十三 | 基因工程和細胞工程
    ☀ 【高中生物】專題一 | 細胞的分子組成【考綱要求】(2)克隆動物遺傳物質的來源：絕大部分來自供體細胞核，少部分來自卵母細胞的細胞質。9.單克隆抗體的製備  ①經免疫處理的B淋巴細胞：能分泌抗體，不能大量增殖。  ①第1次篩選：利用特定選擇培養基篩選，獲得雜交瘤細胞，即AB型細胞(A為經免疫處理的B淋巴細胞，B為骨髓瘤細胞)。
  • 論安瓿瓶的正確打開方式
    如何正確的打開安瓿瓶，小編step-by-step，為您詳細介紹。注意：所有的菌株都有潛在的危險性。因此開啟安瓿瓶必須由受過微生物操作訓練的專業人員進行，並在生物安全櫃中完成。操作時請佩戴手套。請將空管或碎片滅菌後再丟棄。ATCC的安瓿瓶主要有雙管和單管兩種形式。如下圖所示，雙管顧名思義由內外兩個管組成。凍乾粉位於內管底部，上有棉花塞。
  • 分子克隆技術簡介
    第一部分: 什麼是分子克隆      克隆（Clone）是指通過無性繁殖過程所產生的與親代完全相同的子代群體。
  • 細胞培養基使用方法(微孔濾膜過濾除菌)
    細胞培養基的種類繁多，細胞培養方式也較多，如何正確地使用培養基及最大程度地保持培養基的營養以維持細胞的生長，對每個細胞培養工作者都很重要。培養基的使用依據不同的培養基種類、培養方式、細胞種類的不同而存在差異。
  • 無血清培養基的開發
    要開發無血清培養基，關鍵是找出血清中支持細胞生長的所有成分。其必要性在於有些細胞非常挑剔，同時要注意不同細胞系的營養需求差別較大。因此，不可能設計出一種適合所有細胞系的通用培養基。事實上，即使是同一細胞系，其內部的不同克隆，營養需求也存在差異。
  • 培養SW620細胞-空氣培養基是必須的嗎?
    ATCC上SW620細胞的培養體系是L15+10%FBS,L15就是俗稱的空氣培養基，因為不同於通常的氣相5% CO2，L15培養基的氣相是100%空氣。但是在實際培養過程中，我們可能會同時培養很多種細胞，這種情況下還需要為L15培養的細胞設置一個「單間」，就會造成空間上極大的浪費，那麼，對於SW620細胞，有沒有其他常規體系可以替代L15呢？
  • 細胞培養基的種類及應用
    2、MEM細胞培養基又稱低限量Eagle培養基（Minimal Essential Medium），1959年在Eagle's基礎培養基（BME）上修改而來，刪去賴氨酸、生物素，胺基酸濃度增加，適合多種細胞單層生長，有可高壓滅菌品種，是一種最基本、試用範圍最廣的培養基，但因其營養成分所限，針對生產之特定細胞培養與表達時，並不一定是使用效果最佳或者最經濟的培養基
  • 細胞培養 | 常用的培養基及其基本特性
    ，是目前應用十分廣泛的培養基。MEM-Alpha一般用於培養一些難培養細胞類型，而其它沒有特殊之處的細胞株則幾乎均可採用MEM來培養。   3、DMEM-高糖（標準型）是一種應用十分廣泛的培養基，可用於許多哺乳動物細胞培養,更適合高密度懸浮細胞培養。適用於附著性較差，但又不希望它脫離原來生長點的克隆培養，也可用於雜交瘤中骨髓瘤細胞和DNA轉染的轉化細胞的培養。
  • 細胞培養基
    山東博科生物產業有限公司自主研發的五種基礎細胞培養基：高糖DMEM、低糖DMEM、MEM、M199、RPMI-1640，是目前市場上應用最廣泛的五種細胞培養基
  • 新手入門:質粒的轉化,滿滿乾貨|細胞|培養液|培養基|dna_網易訂閱
    2）將該菌懸液按照1:100轉接到液體培養基中，100ml，37℃振蕩擴大培養，2~3h。當培養液開始渾濁時，間段性測試OD600，在數值為0.3-0.5時停止培養。　　　　4）取適當（50ul）的復甦細胞培養液，塗布在含抗性的選擇性培養基上，將培養皿放置在37℃恆溫培養箱中，正置30min。等菌液完全被培養基吸收後，倒置培養皿，在37℃恆溫培養箱中，培養12~16h，出現菌落。
  • 老奧說 | 漫談培養基開發史（二）
    抗體藥的暢銷直接帶動了培養基產業的發展，從90年代的無血清培養基，逐步發展到無蛋白培養基，到目前的完全化學成分確定培養基。一方面培養基的性能顯著提升，更高的細胞密度和蛋白抗體表達水平成為現實；另一方面培養基品牌效應顯著，資源不斷向頭部集中，過程中一次次併購形成了現在的寡頭壟斷格局。
  • 一文解決培養基選擇問題:科研論文可重複性不足 50%,問題出在培養基?
    讓我們一起來研讀培養基的前世今生，學習如何選擇恰當的培養基吧！　　研究結果顯示，「生理培養基」的合成成分影響細胞內代謝組，各種代謝途徑的活性，氧化還原狀態，細胞集群等生理狀態。　　癌細胞利用宿主營養維持生存的方式取決於癌細胞所處的內部和外部環境。飲食介導的全身代謝和全身營養利用的變化會影響癌細胞在腫瘤中內環境的穩態 (2) 。
  • [數據]高效整合CHO細胞株開發和培養基優化的新方案
    挑選到理想的高表達克隆後，就要開始選擇商業化培養基或者定製培養基進行細胞培養優化。傳統的細胞株開發及培養基優化流程存在著眾多不足，耗時耗力，難以滿足企業加快項目進度的需求。因此，採用何種策略能夠減少試驗時間並優化工藝流程，便成為試驗人員一開始就需要思考的問題。
  • 【知識點】細胞培養基到底如何選擇?
    ● 高糖型 DMEM 中的葡萄糖濃度為 4.5 g/L，普遍應用於生長快、粘附性低的細胞、雜交瘤的骨髓瘤細胞、克隆細胞、DNA 轉染的轉化細胞、原代病毒宿主細胞、單一細胞的培養以及疫苗的生產，例如利用CHO 細胞表達 EPO 和生產B肝疫苗。● 使用無糖培養基的主要目的是，通過控制細胞的能量來源，研究細胞的代謝過程或葡萄糖利用效率。
  • 菜鳥學習之旅(一)——無縫克隆(上)
    最近開始了分子生物學中質粒設計和構建實驗，其中設計到無縫連接克隆，正好借著這個機會溫故和知新，一隻小菜鳥的學習之旅開始了。 一.單克隆挑取 轉化過程中會遇到轉化未成功的情況，包括載體未轉入到細胞中；轉入的載體不含有目的片段；轉入了目的片段；轉入載體包含了錯誤的片段等等。所以為了挑選正確的轉化單克隆，常常需要多種手段鑑定。
  • 第六節 目的基因序列克隆的篩選與鑑定
    第六節　目的基因序列克隆的篩選與鑑定 　　目的序列與載體DNA正確連接的效率、重組導入細胞的效率都不是百分之百的，因而最後生長繁殖出來的細胞並不同都帶有目的序列。一般一個載體只攜帶某一段外源DNA，一個細胞只接受一個重組DNA分子。
  • 中國熱帶農科院開發新的分子克隆系統,解決Gateway克隆缺點
    DNA分子克隆技術是分子生物學研究中最經常使用的技術之一。半個世紀前出現的酶切-連接克隆技術打開了基因工程研究的大門。