FSC反映細胞大小，SSC反映細胞內顆粒。學流式時接觸到的這個規律對嗎？
回答是，對於典型的細胞（例如外周血中的淋巴細胞、單核細胞、粒細胞）這個規律是沒錯的，可以大膽應用。
但是，散射光並非這麼簡單，它還受到以下因素的影響：
- 雷射光源的波長
- 散收光收集角度
- 鞘液基質及其中顆粒的折射率
散射光的強度與顆粒的大小、雷射波長均密切相關，如果顆粒直徑大於雷射波長，散射模式就不同。以488nm雷射器激發為例，直徑大於0.5um的顆粒散射模式與小於0.5um的顆粒完全不同。
前向散射光（FSC）與雷射發射方向的角度為0，所以能夠用最不靈敏的檢測器檢測到足夠的信號，因此FSC檢測器成為每個流式細胞儀的最低配置。FSC檢測器前，會放置一塊遮板（Obscuration Bar），當鞘液中沒有細胞或顆粒時，FSC很集中地形成一個光圈，被擋板遮住，不會被檢測器收集，避免誤認為是細胞或顆粒。一般情況下，FSC能夠反映幾乎所有細胞的大小，不過，對於直徑小於雷射波長的顆粒（例如在488nm下檢測0.5um以下的顆粒，如微顆粒、外泌體等），FSC就無法反映顆粒大小，所以導致這些顆粒信號無法與背景信號區分開。
側向散射光（SSC）與雷射發射方向形成一定角度，檢測器會使用更為敏感的光電倍增管，所以能夠提供比FSC更靈敏的解析度。在平時應用中，我們常會用SSC作為閾值將其與背景區分開。
光學上有個「米氏散射理論」，以德國物理學家Gustav Mie名字命名的，認為散射光的強度與角度高度相關，但是米氏理論不適用於0.5um以下的顆粒。哺乳動物細胞內的顆粒基本上都小於0.5um，所以散射光就不遵守米氏理論，這就是為什麼相同大小的細胞和微球其FSC和SSC會不同。
此外，折射率也是影響散射光很重要的因素。遵循米氏理論的顆粒，其散射光大部分由折射光組成，我們從物理學上學到過，不同密度的物質之間，折射率不同，因此，即使兩種細胞大小相同，但由於細胞內部脂質、蛋白質、碳水化合物等比例不同，所以折射率也會不同；兩種微球之間即使大小相同，但材料不同，也會有不同的折射率。這就是為什麼我們在檢測相同大小的細胞或微球時，FSC和SSC位置不同的原因。
綜合上述，我們大致了解了FSC和SSC的檢測原理，以及影響因素。同時，也明白了在檢測、解讀FSC和SSC中需要注意的一些關鍵，相信FLOWER們讀了上述內容後， 在用流式檢測細胞大小、微球大小時應該明白怎麼做了吧！
祝順利！
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