CCK-8實驗需要摸索的條件包括：1、種板細胞數；2、種板後細胞的貼壁生長時間；3、加藥後的孵育時間；4、CCK-8試劑的加入量；5、CCK-8試劑加入後細胞孵育時間。
※※一般加藥會選擇在細胞生長到一半的時候（匯合度50%），這時處於對數生長期，狀態較好。大部分信號檢測的實驗都會選擇這個時候，終點選擇不加藥的對照組（A0加藥組）細胞長到快滿為最合適。CCK-8實驗的最佳OD值在1.0附近，此時A0加藥組OD值最大，最好能控制在1.0左右。
※※加入10ul待測藥物（設置不同濃度梯度）後，稍微搖晃96孔板混勻。
※※檢測OD值前，如果孔內有氣泡，可用小的針頭扎破它，避免影響OD值結果，加量小的液體需貼壁加，量較大時不需貼壁，避免產生更多氣泡。
※※CCK-8需避光，加了CCK-8後常規用鋁箔紙遮蓋，測OD值時拿開蓋子，稍微擋下光。
※※加CCK-8之前最好更換培養基，嚴格上來講CCK-8檢測時的培養基是要不含血清的，可以用針頭吸出培養基；或直接快速的倒掉培養液，在超淨臺旁放一個桶，在臺子裡面打開蓋子，快速地拿出來甩到桶裡面，迅速拿回臺子，一般不會汙染。
※※10ul CCK-8比較難加，容易有氣泡，可按照CCK-8：培養基=10%把需要加的量在離心管內混勻，然後再加入96孔板內。
1、種板細胞數：查文獻（A549：7000個/孔），參考說明書。因為每塊板都會設置對照孔，也就是含有細胞+培養基+CCK-8（A0加藥組），這個數值是板上的最大數值，CCK-8試驗最佳OD值在1.0附近，所以這個最大數值最好能控制在1.0左右。不要讓細胞長滿，一旦長滿了很難去判斷是否堆積生長了，對藥物能否順利進入細胞有影響此為其一，其二生長不均勻易導致孔間OD值數據偏差大，而且OD值也很大。
2、貼壁生長的時間一般為24h，這個時間細胞已經貼壁完全，而且這樣設置時間對自己安排實驗時間也方便。
3、加藥後的孵育時間，我的實驗摸了3個時間：24h，48h，72h。然後根據數據的穩定性（RSD）、OD值的範圍（1.0左右）這些來選擇最好的時間。太長了就沒有必要了，細胞呆在孔裡幾天不換液的結果可想而知了。
4、CCK-8試劑加入量，說明書中明確寫出建議加入量為培養基體積的10%。這裡有一個問題：假設我要孔內是200微升的體系，即細胞懸液+藥液+CCK-8=200微升呢，還是細胞懸液+藥液=200微升，CCK-8不算在體系內呢。關於這一點文獻報導不一致。本人最終採用的是後者。
5、CCK-8試劑加入後孵育時間，隨著時間的增加，OD值就會增大。總之原則就是把OD值控制在1.0左右。這裡我考察了0.5h、1.0h、1.5h、2.0h。
註：種7000-8000個/孔100（ul），貼壁24小時後加藥（5,10,20,40,80,160,320ug/ml），作用24小時後更換培養液，加入cck-8與培養基混勻，每孔加110ul，測0.5,1,1.5,2，2.5,3小時OD值。