山羊血清的性質與應用

2021-01-15 ChemicalBook

來源：ChemicalBook

背景[1-4]

山羊血清採自健康山羊，經無菌採集、批量混合，最終過3次0.1μm過濾分裝而成。山羊血清為純天然製品，不含任何人為的添加成分，適用於科研或診斷試劑生產用。可以替代FBS用於大多數細胞系和原代細胞培養，也可用於病毒的培養和研究、魚類細胞的培養、免疫反應中的封閉和稀釋液的製備。

山羊封閉血清適用於免疫組化或者免疫螢光實驗中樣本的封閉。可以封閉待檢樣本中與蛋白質非特異性結合的位點，另外還可以封閉樣品中內源性的Fc片段結合位點，阻斷抗體與樣品中的Fc受體結合，從而降低背景，減少假陽性。在選擇封閉血清時，要注意封閉用血清中不能含有目標蛋白，且與一抗來源不同，可用與二抗相同來源的封閉血清。

山羊正常血清是用來描述來自沒有用特異抗原進行免疫產生抗體的動物的血清。因此，山羊正常血清與山羊抗血清相對.正常血清包含血清蛋白的一般補體，包括存在於特定物種健康動物體內的不同種類的免疫球蛋白.提供的正常血清產品經過脂類抽提以提高透明度，經去鹽和透析處理以去除包含疊氮化鈉的磷酸緩衝液，並最後凍幹以獲得凍乾粉末.正常血清非常適用於作為封閉試劑去除非特異性雜交。

山羊正常血清在檢測一般或特異抗體純化方法的時候也經常作為對照使用.瓶裝血清解凍需採用緩慢解凍法：把在-15~-40℃低溫冰箱中保存的血清放入4℃冰箱中解凍約1天，待全部解凍後再分裝。在解凍過程中每隔約2小時可輕輕搖晃均勻(儘量避免產生氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉澱的發生。切勿直接將血清從-20℃或更低溫度進入37℃水浴解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝集而出現沉澱，從而使用血清的質量下降。

血清中的絮狀沉澱物主要是解凍後血清中纖維蛋白及4℃長時間保存後血清中的脂蛋白變性造成的，這些絮狀物不會影響血清本身的質量，可不用處理。如果必須要處理，可400g離心5分鐘去除。但不宜過濾去除，因為絮狀物可能阻塞濾膜。經過熱處理的血清中沉澱物會顯著增多。有些沉澱物在顯微鏡下觀察像「小黑點」，而且由於這些「小黑點」的布朗運動在顯微鏡下被放大，感覺是在遊動，所以經常被誤認為血清被微生物汙染。

通常這些小黑點不會影響細胞生長，但如果懷疑血清存在微生物汙染，則應立即停止使用，更換另一批次的血清。可將適量血清用培養液稀釋至10%濃度後培養1-3天，觀察小黑點是否急劇增多，或取適量血清在LB平板上塗板培養觀察是否產生菌落，以確定是否存在微生物汙染。

應用[5][6]

山羊血清可用於間接競爭ELISA檢測：

製備抗CD58單克隆抗體，在此基礎上建立可用於定量檢測山羊血清中CD58含量的間接競爭ELISA方法。方法以純化的CD58蛋白為抗原免疫BALB/c小鼠，通過雜交瘤細胞融合技術製備抗CD58單抗，並對其特異性進行鑑定；在此基礎上，建立CD58間接競爭ELISA檢測方法，對不同生理時期山羊血清中CD58的含量進行檢測。

結果篩選出1株穩定分泌抗CD58單克隆抗體的雜交瘤細胞株G6;玫瑰花環抑制試驗和Western-blotting試驗表明，製備的細胞株能分泌針對CD58的特異性單克隆抗體；對間接競爭ELISA方法的反應條件進行優化後，建立了檢測CD58的間接競爭ELISA方法，該方法最適可測範圍為10~1000000 ng/mL,理論最低檢測限為3.087 ng/mL,批內和批間平均變異係數分別為3.50%和5.22%;用建立的方法檢測未發情和發情山羊血清中CD58含量分別為(32.160±3.69)和(35.929±3.08)μg/mL,懷孕山羊血清中CD58含量為(61.564±5.10)μg/mL。

結論建立了山羊血清中CD58間接競爭ELISA檢測方法，該方法敏感、特異，具有良好的重複性；對不同生理時期山羊血清中CD58含量的檢測表明，懷孕山羊血清中CD58含量顯著高於未發情和發情山羊。

參考文獻

[1]Human effector memory CD4+T cells directlyrecognize allogeneic endothelial cellsin vitroandin vivo.Stephen L Shiao,Nancy C Kirkiles-Smith,Benjamin R Shep-herd,et al.The Journal of Immunology.2007

[2]Red blood cells promote survival and cell cycle progression of human peripheral blood T cells independently of CD58/LFA-3 and heme compounds.Fonseca AM,Pereira CF,Porto G,et al.Cellular Immunology.2003

[3]Expression of porcine epidermal growth factor in Pichia pastoris and its biology activity in early-weaned piglets.Lee D N,Kuo T Y,Chen M C,et al.Life Sciences.2006

[4]Immunological aspects of pregnanly:Concepts and speculations using the sheep as a model.Hansen P J,Wenjun L.Animal Reproduction Science.1996

[5]Red blood cells promote survival and cell cycle progression of human peripheral blood T cells independently of CD58/LFA-3 and heme compounds[J].Cellular Immunology.2003(1)

[6]高紀振，周麗梅，王愛華，靳亞平，宋毓民，吳慶俠.山羊血清中CD58間接競爭ELISA檢測方法的建立[J].西北農林科技大學學報(自然科學版),2009,37(08):25-30.

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