HALO-2.7 PFP色譜柱技術特性

　　●通用的UHPLC色譜柱既可用於UHPLC也可以用於傳統的HPLC設備

　　●選擇不一樣的鍵合相可以實現其他種類的鍵合相不能完成的分離

　　●特別適用於分析鹼性化合物和滷代物

　　●在高含水流動相條件下實現使極性化合物的保留和分離

　　●穩定的鍵合相提供優異的耐用性、長的柱壽命加之極低的流失適用於LC/MS

　　●鹼性去活使其分離鹼性化合物時具有良好峰形

　　●溫和的反壓給UHPLC設備施加很小的壓力，並且允許此類UHPLC色譜柱用於傳統HPLC儀器

　　●2 μm篩板的使用減少很多由於篩板堵塞導致壓力升高帶來的不便，並且使HALO色譜柱比亞2 μm顆粒填充的色譜柱更容易使用

　　HALO Fused-Core®顆粒技術使在傳統HPLC或者UHPLC設備上實現超高速、高分辨的UHPLC分離變得很容易。目前，用五氟苯基(PFP)填充的HALO色譜柱為達到最高要求的分離提供了一個廣泛而又強有力的選擇性。HALO PFP特別適合滷化物、硝基芳香族化合物和極性化合物的分離。當C18 或者C8 沒能得到滿意的分離效果時，則可以考慮HALO PFP。HALO PFP色譜柱也適用於需要高比例水相流動相的高水溶性化合物的分離，而且對於強鹼性物質比C18相的保留更強。

　　HALO PFP運用專有的化學鍵合方法達到極好的柱穩定性和很長的柱壽命。HALO PFP超低流失的性質非常適合用於LC/MS。正如所有HALO柱的固定相一樣，超純試劑、「B型」矽膠、密集。鍵合技術和完全封端的組合產生出一種對鹼性化合物能夠產生極好峰形的鹼基去活固定相。

　　分離機理

　　使用HALO PFP色譜柱的反相保留機理主要是受氫鍵和偶極作用影響。然而，π–π作用和弱疏水作用經常對色譜柱的保留和選擇性有影響。此外，極性五氟苯基基團使HALO PFP適合用於親水色譜的。

圖1  HALO PFP鍵合相示意圖

圖2  HALO PFP 產生和C18 不同的選擇性

　　色譜條件：

　　色譜柱：4.6×50 mm

　　流動相：30/70 water/MeOH

　　溫度：40 ℃

　　流速：2.0 mL/min

　　壓力：215 bar

　　檢測：UV at 254 nm (VWD)

　　樣品：

　　1. 丁基苯

　　2.苊

　　3.1-苯基萘

　　4.芘

　　圖2 表明HALO PFP與HALO C18選擇性不同。在HALO PFP 上，1-苯基萘和芘的分離效果更好是由於π–π相互作用。在HALO C18上，較強疏水鍵相互作用導致丁基苯的保留時間較長。這種相互作用導致的選擇性的差異是通過丁基苯和苊在HALO C18與HALO PFP上的洗脫順序的改變表現出來的。

　　中性芳香族化合物的分離表明HALO C18與HALO PFP選擇性的差異。由於PFP提供的π-π作用和C18相較強疏水作用導致在兩相中峰寬和出峰順序的顯著差異。HALO PFP具有與HALO C18的不一樣的選擇性，使其可以用於建立分析方法。

圖3  HALO PFP 的多功能性，可以用於HILIC模式下鹼性藥物的分離

　　色譜條件：

　　色譜柱：4.6×50 mm

　　流動相：12/88 0.01 甲酸銨緩衝鹽，pH=3/乙腈

　　溫度：30 ℃

　　流速：1.5 mL/min

　　壓力：75 bar

　　檢測：UV at 254 nm (VWD)

　　樣品：

　　1. 苯腎上腺素

　　2. 曲唑酮

　　3. 普魯卡因

　　4.阿莫沙平

　　5.心得安

　　6.去鬱敏

　　在反相模式下弱保留的高極性化合物在HALO PFP的親水模式下能被強保留。對於LC-MS應用而言，親水色譜經常具有較高的靈敏性，歸因於流動相中較高濃度的有機組分。

　　圖3 說明了HALO PFP多功能性，用親水模式分離鹼性藥物。對於在反相模式下弱保留的極性化合物而言，這種模式特別適用。此外，通常親水模式流動相中具有比反相模式更高比例的有機組分，因此，增強了LC/MS的靈敏度。

　　HALO色譜柱技術諮詢：

　　通微蘇州分公司-蘇州環球色譜有限責任公司 李靜博士

　　江蘇省蘇州高新區濱河路1326號125 郵編: 215011

　　電話：[phone]

　　E-mail: [e-mail]　　

　　附錄：HALO色譜柱及熔融核(核-殼)技術簡介

　　熔融核技術是由傑克柯克蘭(J.J.Kirkland)所發明的。柯克蘭教授被公認為是HPLC的創建者之一，並且他的研究和貢獻是被色譜界人士廣泛認同的。他發表了超過150份主要研究文獻和6本書籍。柯克蘭博士還擁有30項專利，並且在色譜領域已經獲得了很多著名獎項。

　　HALO柱填料不是按照常規方式製作的。相反，HALO UHPLC所填充的填料是利用Fused-core(熔融核/核殼)技術製備出來的，可以實現超快速色譜分離，同時避免了UHPLC的一些不足之處。

HALO 熔融核顆粒

　　Fused-core 填料技術是由 Jack Kirkland 發明的，該類填料最初是為了使得UHPLC色譜柱比常規2μm填料UHPLC色譜柱更堅固可靠。正如它的名字一樣，Fused-core 即是將多孔矽膠殼熔融到實心矽膠顆粒表面。

　　HALO色譜柱所產生的反壓明顯低於UHPLC色譜柱。這樣的低反壓可以使儀器承受壓力降低，使操作起來更為方便。正是HALO柱適度的反壓使得他們能用於常規的HPLC儀器卻實現近似UHPLC的性能。此外，HALO色譜柱所用的篩板的孔徑要遠遠大於UHPLC色譜柱(2 μm vs 0.5 μm)。這個更大的孔隙柱入口篩板減少了UHPLC柱入口篩板的堵塞問題。事實上,HALO柱的入口篩板不會比常規的填充5μm顆粒的柱子上的篩板小，不可思議吧。

　　「熔融核矽膠柱能減少擴散質路徑，允許使用更短的柱子和較高的流速以達到明顯的快速高解析度分離。」

　　——Analytical chemistry，2007年8月