你的高效液相色譜柱「任性」嗎?

北極星環境監測網訊:色譜柱是高效液相色譜的核心部件。它主要起到了分離作用。色譜柱同樣也是一個消耗品，在流動相衝刷的過程和樣品在分析的過程，填料損失和汙染使得色譜柱的性能慢慢下降。所以，對於高效液相色譜尤其是常用的C18柱，需要在一定時間內對其性能做一個評估，同樣，新的色譜柱也要對色譜柱做一個有效的體檢。這個體檢就是評估色譜柱的性能。

在講評估色譜柱性能之前，青青草老師講一段自己的經歷。

曾經在07年我在一家儀器公司從事裝色譜柱工作，是商品柱哦。主要是3微米，5微米，10微米C18分析柱子，其中前兩個顆粒大小的色譜柱是分析型色譜柱。反相色譜柱最一般的規格型號是4.6mm內徑，150mm，250mm長度，顆粒度一般有3微米，5微米，其中5微米比較多。當然還有其他規格長度的色譜柱，這裡就不再展開講述了。色譜柱主要是兩端封有篩板柱頭，中間的空心不鏽鋼管子中裝有填料。這些填料主要作用就是吸附樣品，同樣，在流動相推動下，混合樣品中各物質由於結構性質不同，從而使得他們被吸附脫附的能力不同，被分離。

高效液相色譜柱，尤其是C18的反相色譜柱是通過高壓勻漿的方法裝填的。

通過勻漿液使得色譜填料均勻懸浮在勻漿管中，勻漿管下面裝有一根空的色譜管，這根色譜管底部用柱頭和篩板固定，通過泵的瞬間高壓，流動相將色譜填料填壓入色譜管，穩定片刻後，另一頭裝上篩板和柱頭，即可。由於裝填色譜柱受到很多的因素影響，所以，不是每一根色譜柱都是能夠裝填好的，所以，新的色譜柱要通過測試其性能，其性能符合要求，才能夠銷售。

而我們客戶呢，對於購置的新色譜柱，首先需要測試其性能，包括有效塔板數，拖尾因子。這個是最重要的指標。如果這些指標符合要求，那麼這根色譜柱是OK的。大家知道，有些小公司沒有HPLC，他們銷售的色譜柱有可能是不好的，所以，對新色譜柱建立性能檔案是很有必要。如果不合格的新色譜柱，立即向供應商調換，才能夠保證你的權益。

那麼如何測試色譜柱性能呢？

這裡qingqingcao老師給出兩個基本的公式。有效塔板數，拖尾因子。

1.有效板數塔

在我們學習色譜理論時候，我們講過理論塔板數，有效塔板數。這裡我不再講述公式如何來的。我們這裡打個比方，現在我手頭有兩個同樣長度，同樣內徑，同樣填料,填料的顆粒度相同的C18色譜柱,一根裝的緊，一根裝的松，那麼大家認為你會選哪根？答案是必然的，當然首選緊的那根。原因是裝的緊的那根色譜柱，單位體積內填料多，填料多那麼分離效果就好，而松的那根，單位體積填料少，那麼分離效果就顯得差。那麼如何判斷相同規格型號長度的色譜柱填料填的多寡，那麼就需要用到有效塔板數了。也就是說，通過相同條件下測試同一物質，有效塔板數多的那根色譜性能高，填料填的多，反之就是不好的那根。

我們首先給出公式：

其中，to是死時間，也就是物質不被保留，在色譜系統中走過的時間。一般可以認為進樣衝擊是死時間。或者剪一根和色譜柱相同長度的空管，裝在色譜柱位置，以純水為流動相，相同流速，進甲醇，以254nm為檢測波長，出來峰的那個時間一般認為是死時間。這個方法確實比較粗糙，但是管用。

我們看下公式，相同濃度同一物質，相同色譜條件下，如果半峰寬一致的情況下，某物質被保留的時間越長，則有效塔板數越多。試想，色譜柱越長，填料相同內徑相同，裝填效果相同的條件下，長的色譜柱必定性能好。

同樣，色譜樣品條件相同的情況下，半峰寬越窄，色譜柱越好。也就是說，填料裝的越緊越好。

其中tm-t0是調整保留時間。W1/2h是半峰寬。

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