HPLC和UHPLC色譜柱的十大誤區
2020-11-23 儀器信息網 
誤區10：空氣會徹底毀滅一根HPLC色譜柱——假!
當色譜柱不與色譜儀連接的時候，用戶需確保色譜柱被緊緊地密封。事實上實際的應用中是，即使柱的端部進入了少量的空氣也不要緊。因為當你將色譜柱連接到色譜儀上使用時，在系統初始加壓階段，在很短的時間內空氣就會被溶劑衝刷掉。
誤區9：所有的C18(L1)色譜柱都是一樣的——假!
美國藥典委員會(USP)開發了一種分類系統，用來對每種類型的鍵合相柱進行分類。由於C18色譜柱是一種廣泛應用的色譜柱，故該系統將其稱為「L1」。可惜不幸的是，大約有800種以上的L1流入了市場，因此，事實證明這個系統是不可靠的，是一個令人困惑的系統。
誤區8：反相色譜柱不可以使用純水相——假!
這個誤解其實是起源於有些用戶在使用低有機溶劑含量或者純水作為反相色譜柱的流動相時，發生了俗稱相塌陷的現象，所以大家就認為反相色譜柱不可以使用純水相。許多色譜工作者都被相塌陷現象和保留時間位移現象困擾著，甚至已經失去了努力尋找解決途徑的耐心。因此，他們索性就認為不應該在反相色譜柱中運行水含量很高的流動相。然而，事實上市售的反相色譜柱(如極性嵌入和極性封端柱)都是具有水浸潤性的，其表面特性是允許使用純水的，而不會導致塌陷或者保留時間移位。
誤區7：至少需要10個柱體積才能重新使LC色譜柱達到平衡——假!
平衡時間對於梯度色譜來說非常重要的，因為它是整個技術的限制因素。這有兩種平衡類型：重複平衡和完全平衡。重複平衡也就意味著在無法實現完全平衡的情況下達到的平衡。實際上，如果在隨後的運行中，保留時間的重複性是小於0.002 min的，然後對於非離子化溶質的無緩衝洗脫劑和鹼性化合物以常用的三氟乙酸和甲酸為添加劑的話，重複平衡在兩個柱體積的範圍內即可實現。
誤區6：相較之純的多孔粒子，表面多孔顆粒會顯著降低樣品容量——假!
HPLC色譜柱填料對樣品的容量是與其表面積成正比的，這與矽醇基通過單體鍵合形成的化學鍵合相的量相關。然而，研究結果表明：在相同的試驗條件下，表面多孔顆粒與多孔粒子對樣品的容量是基本上相同的。
誤區5: UHPLC填料柱比常見的HPLC填料柱更容易堵塞——假!
隨著柱填料多孔材料粒徑的不斷減小，使得柱的主要硬體設計跟著一起發生變化。對於sub-2µm UHPLC柱的堵塞，是樣品和流動相物質倒伏在柱入口的結果。如果你在進樣前對樣品進行了淨化如使用固相萃取、過濾或離心等，就可以避開任何汙染問題。
誤區4：保護柱是沒必要的——假!
使用保護柱有很多好處。首先，保護柱可以防止化學物質或顆粒物損壞分析柱。其次，相較之更換一根昂貴的分析柱，更換一根5mm 的保護柱只需要很少的花費。現代的保護柱具有幾乎無死體積、更換快速，以及適用於UHPLC的高壓等優點。
誤區3：你不可以將HPLC色譜柱反接以便於衝洗掉其中的顆粒物——假(但有時真)!
實際上HPLC色譜柱的填裝壓力比最大使用壓力高很多(通常會高2倍)。如果裝柱時使用了恰當的勻漿劑，並且分配一定的時間使柱床穩定，一支填裝良好的色譜柱是完全可以雙向使用的。
反向使用色譜柱有一個例外，就是生產商在色譜柱的進樣端使用了孔徑更大篩板的情況，反向使用可能會將填料從柱床衝出。如果製造商在柱的入口處使用的是高孔隙率的玻璃料，那麼將柱反衝的話，可能會將柱填料從填充床上衝洗掉。色譜柱在工廠填裝時，出口端的篩板孔徑必須比色譜柱中最小顆粒的粒徑還要小。譬如，色譜填料平均粒徑是5μm，粒徑分布範圍是3-7μm，出口端篩板孔徑必須小於3μm，使填料沒有可能從柱床跑到色譜柱篩板外面。大多數生產廠家選擇的篩板孔徑是2μm。 至於某些廠家兩端的柱篩板孔徑不一樣，一般是進樣端大些，出樣端小些。因此，一些製造商會在柱子標籤處放置一個箭頭指示，表明必須僅在一個方向上使用。可以肯定有這種可能性，所以一個色譜工作者應該好好閱讀色譜柱手冊或說明書，或與製造商確定這根色譜柱是否可以反衝。
誤區2：色譜柱填料粒徑越小、壓力越高，分離效果越好——假!
超小的粒徑以及超高的柱壓，並不一定是色譜工作者的最佳選擇!
現代色譜柱的柱特性研究已經引發出一些新方法來評估一根色譜柱的性能。例如，採用新的表面多孔材料的色譜柱，其柱效與sub-2µm UHPLC柱效一樣好，然而與常規的LC填料色譜柱比起來，柱壓很低。
誤區1：柱壓不會影響色譜分離效果——假!
色譜的很多參數都是受柱壓影響的，包括部分溶質的摩爾體積、停滯體積、柱孔隙度、保留因子、流動相密度、介電常數、固定相結構、pH和電離常數等。為什麼柱壓引起了越來越多的關注呢?原因是市售的色譜儀很多是超高壓色譜儀和色譜柱。當色譜柱在約13.789MPa壓力下運行時，即使保留時間上存在小差異，也並不會引起我們的注意;特別是如果重複性較好及定量不受影響的時候。但是，當柱壓接近13.789MPa時，柱壓的影響可能就相當明顯了。
譯自：chromatographyonline
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實際上HPLC色譜柱的填裝壓力比最大使用壓力高很多（通常會高2倍）。如果裝柱時使用了恰當的勻漿劑，並且分配一定的時間使柱床穩定，一支填裝良好的色譜柱是完全可以雙向使用的。液相色譜柱上基本都有->標誌，表示流動相的流動方向，有的在色譜柱上印有「Nerver Lot Flow in the Opposite Direction」字樣，翻譯成「決不能反衝」的意思，色譜柱可以反衝嗎、色譜柱能不能反衝的問題爭議很大，但在我們工作中，用色譜柱反衝技術修複色譜柱可以收到柱效提高、柱效恢復的效果。 -
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本文作者Luffy。 -
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