新型冠狀病毒雙重螢光RT-PCR檢測方法

2020-11-28 中國質量新聞網

   楊宇1，劉麗娟1，趙婷婷1，李輝2，王莎莎1，徐煥州1，楊鵬飛1，王旺1，孫肖紅1，王靜1

    1中國檢驗檢疫科學研究院衛生檢疫研究所，北京100123；2.上海輝睿生物科技有限公司

    摘要：目的為快速檢測新型冠狀病毒，防控疫情的輸入，建立一種快速的雙重實時螢光RT-PCR檢測方法。方法對WHO公布的單重實時螢光RT-PCR檢測引物和探針進行重新設計和優化，建立雙重螢光RT-PCR反應體系，分別採用羧基螢光素（FAM）和綠色螢光蛋白（VIC）螢光基團標記探針，實現雙基因的同時檢測。結果經優化的雙重實時螢光RT-PCR方法有較好的靈敏度和特異性，對陽性對照質粒檢測靈敏度為31拷貝/μl，檢測健康和普通發熱人員咽拭子以及流感病毒無交叉反應。結論建立了雙重實時螢光RT-PCR快速檢測方法，提高檢測效率和準確度的同時降低了成本，可用於新型冠狀病毒的快速應急檢測。

    關鍵詞：實時螢光PCR；新型冠狀病毒；檢測；交叉反應

    中圖分類號：R183.4　文獻標識碼：B

    Multiplex Real-time PCR method for rapiddetection of

    Novel Coronavirus

    YANG Yu*, LIU Li-juan, ZHAO Ting-ting, LIHui, WANG Sha-sha, XU Huan-zhou,

    YANG Peng-fei, WANG wang, SUN Xiao-hong, WANGJing

    *Institute of Health Quarantine, ChineseAcademy Of Inspection and Quarantine, Beijing 100123,China

    Abstract:   Objective  To establish a rapid, sensitive method to detect Novel Coronaviruswhich are acute infections with high case fatality rates bymultiplex real-time fluorescence quantitative RT- PCR. Methods   Taqman probes labeled by FAM and VIC. Themultiplex real-time quantitative RT-PCR assay was optimized basedon the reported mono assay.  The sensitivity was evaluated andinfluenza virus and human swab were using to examine thespecificity.  Results   A specic real-time RT-PCRmethod was developed with the sensitivity of 31copies/μl for NovelCoronavirus, a synthetic plasmid DNA as a positive control，and nocross reaction was found with Influenza virus and human swabsamples.  Conclusion   This multiple assay has goodprospects of application for rapid test.

    Key words:   Multiplex Real-timePCR; Novel Coronavirus; Detection; Cross reaction

    《中國國境衛生檢疫雜誌》2012年第5期

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