一、細胞凍存方法
• 當細胞冷到零度以下，可以產生以下變化：細胞器脫水，細胞中可溶性物質濃度升高，並在細胞內形成冰晶。
• 如果緩慢冷凍，可使細胞逐步脫水，細胞內不致產生大的冰晶；相反．結晶就大，大結晶會造成細胞膜、細胞器的損傷和破裂。復甦過程應快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結晶。
• 在細胞凍存時加入保護劑，能大大提高凍存效果。
• 常用的低溫保護劑是DMSO，它是一種滲透性保護劑，可迅速透入細胞，提高胞膜對水的通透性，降低冰點，延緩凍結過程，能使細胞內水分在凍結前透出細胞外，在胞外形成冰晶，減少胞內冰晶，從而減少冰晶對細胞的損傷。（1）、冷凍前一日提前更換半量或全量培養基，觀察細胞生長情形。
（2）、配製冷凍保存溶液(使用前配製)：將DMSO 加入新鮮培養基中，最後濃度為 5-10％，混合 均勻，置於室溫下待用。（預先配製凍存液： 含20%血清培養基，10% DMSO加基礎培養基 ）
（3）、按常規方法消化處於對數生長期的細胞培養物，製備單細胞懸液，並計算細胞總數；
（4）、將細胞懸液以800～1000r/min離心5min，去上清夜；
（5）、向細胞沉澱物中加入冷凍保護液，輕輕吹打混勻，使細胞密度達1×106～1×107個/ml；
（6）、按每管1～1.5ml的量分裝於凍存管內，擰緊管蓋；
（7）、再凍存管上做好標記，包括細胞代號及凍存日期。
冷凍保存方法1: 冷凍管置於4 oC 40 分鐘→ -20 oC 30 分鐘→ -80 oC 16～18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。
注意點：
（1）細胞在-20度冰箱不能超過1h，以免冰晶過大破壞細胞，可跳過-20直接到-80，這樣細胞活率低點。
（2）DMSO稀釋時會放出大量熱，不可直接加到細胞液中要提前配製。
（3）DMSO必須時細胞培養級別的，新買的本身是無菌的，第一次開瓶後立即少量分裝於無菌瓶中，4度保存，避免反覆凍容產生有毒物質。
二、細胞復甦（要點動作要快，輕）
（1）、調配370C～400C的溫水，或將恆溫水浴箱的溫度調節至370C～400C；
（2）、從液氮中取出凍存管，立即投入370C～400C 溫水中迅速晃動，直至凍存液完全溶解；
（3）、將細胞凍存懸液轉移到離心管內，加入約5ml培養液，輕輕吹打混勻；
（4）、將細胞懸液經800～1000r/min離心5min，棄上清夜；
（5）、向細胞沉澱內加入完全培養液，輕輕吹打混勻，將細胞懸液轉移到培養瓶內，補足培養液進行培養。
注意點：
（1）注意安全，以防冷凍管爆炸，帶手套用鑷子將冷凍管取出，不可用手。
（2）解凍時，液面不可超過凍存管面，以防汙染。