異雙功能交聯劑的基礎研究了解

異雙功能交聯劑的基礎研究了解

異源雙功能，兩步，光反應交聯：

異源雙功能交聯劑（heterobifunctional crosslinker）含有不同的反應基團。反應基團的特定組合需要進行兩步交聯。對於蛋白相互作用研究，交聯反應基團最有用的組合是一端的氨基特異性反應基團（自發反應）和另外一端的非特異性的光反應基團（光激活）。這種安排使得純化的誘餌蛋白通過與伯胺反應而被標記上交聯劑。被標記的誘餌蛋白之後加入到含有假定相互作用蛋白的細胞或樣品中。一旦相互作用複合物形成，將樣品用紫外光照射從而激活光反應基團與鄰近的功能基團隨機地交聯。在這裡，交聯劑和誘餌蛋白同時加入，因此可以將脫靶交聯降至最低。

光反應胺基酸：

光反應活性胺基酸為兩步光反應交聯方法提供了新的選擇。將表達誘餌蛋白（或誘餌和獵物蛋白）的細胞培養於含有L-亮氨酸和L-甲硫氨酸的光反應類似物的培養基中，相互作用複合物中蛋白被合成含有雙吖丙啶光反應基團，從而用於隨後的交聯反應。

標記轉移試劑：

標記轉移是指用標記的交聯劑交聯相互作用分子（例如誘餌和獵物蛋白），之後切斷誘餌和獵物蛋白之間的連接，標記分子保留連接於獵物分子上。這種方法非常有用，因為其可鑑別與感興趣的蛋白發生弱相互作用或瞬時相互作用的蛋白。最早的標記轉移試劑為APDP 等，含有一個光反應活性的羥苯基疊氮基團，可使用碘–125（125I）進行標記。

新一代的多功能標記轉移試劑，在可剪切的間隔臂的獵物靶向且具有光反應活性的一端包含生物素基團。生物素標記可以用於純化捕獲的獵物蛋白或誘餌-獵物複合物，並且可通過Western blotting 進行檢測。Sulfo–SBED和Mts–Atf–Biotin 試劑是這種類型交聯劑的代表。

產品供應列表：

上述產品僅用於科研，不可用於人體試驗！

小編：wyf 2020.10.27