固相萃取-高效液相色譜法同時測定奶粉中的維生素A、D3、E

2020-11-23 OFweek

　　奶粉中維生素含量是奶粉質量的一個重要指標，目前對奶粉中脂溶性維生素A、D3、E測定的前處理方法多採用酶解法及皂化方法去除脂肪［1-6］。酶解法由於試劑昂貴，操作繁瑣，不適用於大批量實際樣品的測定；皂化過程中使用大量的有機溶劑且操作步驟複雜，維生素D3樣品還需經矽膠柱做進一步的淨化才能進行檢測，造成實驗時間成本的增加，同樣不利於大批量樣品的檢測。

　　鑑於上述情況，本公司研究了利用固相萃取法作為奶粉樣品的前處理方法，高效液相色譜法作為檢測手段，實現同時測定奶粉中維生素A、D3、E的含量，建立了簡便、快速測定全脂奶粉中維生素A、D3、E的固相萃取-高效液相色譜法，該方法可大大簡化奶粉樣品的前處理過程。

　　1實驗部分

　　1.1 儀器及材料

　　儀器：Agela LC-10F；渦旋混合器；超聲儀；離心機；氮吹儀；萬分之一天平。

　　材料：Cleanert® FAT油脂專用柱；石油醚（30℃~60℃沸程）、甲醇、正己烷、乙酸乙酯均為色譜純；維生素A標準品；維生素D3標準品；維生素E標準品；某品牌全脂奶粉；0.22µm Nylon濾頭。

　　1.2液相色譜條件

　　色譜柱：Venusil® MP C18，4.6 mm *150 mm，5µm；

　　流動相：甲醇；

　　流速：1mL/min；

　　柱溫：30℃；

　　進樣量：20µL；

　　波長變化見表1：

表1 波長變化梯度表

化合物

時間

（min）

波長

(nm)

維生素A

0

325

維生素D3

5

264

維生素E

8.5

294

　　1.3 樣品處理

　　用分析天平取1g奶粉樣品於離心管中，加入10mL石油醚，渦旋2min，超聲2min，於4000r/min下離心5min，轉移上清液至乾淨的樣品瓶中，待淨化。

　　SPE過程如下：

　　（1） 活化：將5mL正己烷過Cleanert® FAT柱；

　　（2） 上樣：將待淨化液上樣到Cleanert® FAT柱；

　　（3） 淋洗：用5mL正己烷淋洗Cleanert® FAT柱；

　　（4） 洗脫：用5mL乙酸乙酯洗脫Cleanert® FAT柱，收集洗脫液。

　　上述操作步驟均為溶劑由重力作用滴下，不需施加外力。將洗脫液於35℃氮吹乾，用1mL甲醇重定容，渦旋30秒，0.22µm Nylon濾頭過濾，待HPLC檢測。

　　2 結果與討論

　　2.1 標準溶液色譜圖

　　取標準溶液按照液相色譜條件進行分析，得到色譜圖如圖1：

圖1 低濃度維生素標準溶液的色譜圖

　　樣品濃度為：維生素A（0.5µg/mL）、維生素D3（0.98µg/mL）、維生素E（9.9µg/mL）

 

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