本文優化了高效液相色譜儀測定飼料中三聚氰胺的色譜分離條件。該方法線性關係良好, 有較高的回收率和較好的精密度, 飼料中雜質峰對三聚氰胺出峰幹擾少, 方法簡單, 易於操作, 準確度與精密度符合要求, 可用於配合飼料中三聚氰胺的檢測。
1、儀器
高效液相色譜儀, 配紫外檢測器及色譜工作站;
氮吹儀;
振蕩器、 旋渦振蕩器及均質器;
電子分析天平, 感量為 0.0001g ;
冷凍離心機;
0.45μm 針筒式微孔濾膜過濾器,
超聲波清洗器,
混合型陽離子交換柱, 60mg/3mL ,
固相萃取儀,
pH 計。
2、試劑
三聚氰胺對照品 ：含量為 99.0%),
乙腈、甲醇與庚烷磺酸鈉為色譜純,
氨水、乙酸、乙酸鉛等均為分析純, 實驗用水為超純水。
3、溶液配製
3.1：1% 乙 酸 溶 液 : 量 取 5mL 冰 乙 酸 於500mL 容量瓶, 加水稀釋並定容至刻度。
3.2：5% 氨水甲醇溶液: 量取 5mL 氨水於100mL 容量瓶, 加甲醇定容至刻度。
3.3：乙酸鉛溶液 22g/L : 取 11g 乙酸鉛用300mL 水溶解後定容到 500mL 。
3.4：20% 甲醇溶液: 取 200mL 甲醇, 加入800mL 水, 混勻。
3.5：流動相: 取 2.02g 庚烷磺酸鈉於 1L 容量瓶中, 用水溶解並稀釋至刻度, 加乙酸調 pH 到 3.3 。取該溶液 850mL , 加入 150mL 乙腈, 混勻, 過濾、脫氣。
3.6：三聚氰胺標準貯備液: 準確稱取三聚氰胺對照品 0.0505g 於 50mL 溶量瓶中, 用甲醇溶液超聲溶解並定容, 即為 1 000μg/mL 三聚氰胺標準貯備液。
3.7：三聚氰胺標準工作液: 取適量三聚氰胺標準貯備液, 用甲醇溶液稀釋使成濃度為 1.0μg/mL 、 5.0μg/mL 、 10.0μg/mL 、 25.0μg/mL 、 50.0μg/mL 5個標準系列。
4、色譜條件
色譜柱：C8 柱 ( 4.6mm×250mm , 5μm ) ;
流速 1.0 mL/min ;
進樣量: 20μL ;
柱溫: 30℃ ;
檢測波長: 240nm 。
5、試驗方法
樣品處理方法: 飼料樣品用勻漿機混碎,稱取 5.0g 試樣 ( 精確至 0.01g) 於 150mL 具塞錐形瓶中, 準確加入 50mL1% 乙酸溶液, 加入 2.0mL 乙酸鉛溶液, 搖勻, 超聲提取 20min 。靜止2min , 取上層液約 30mL 於 50mL 具塞離心管中, 10 000r/min 離心 5min 。
取上清液 10mL 分次過預先經 3mL 甲醇和 3mL 水活化的 Strata- X- C柱,再用 3mL 水和3mL 甲醇洗滌固相萃取柱, 抽乾後用 3 mL 氨水甲醇溶液洗脫 , 50℃ 氮氣吹乾, 準確加入 2.0mL 甲醇溶液, 旋渦振蕩 1min, 過0.45μm 濾膜後上機測定。