1 範圍
本方法規定了保健食品中蟲草素的液相色譜測定方法。
本方法適用於保健品食品中蟲草素的測定。
2 原理
試樣經酸水溶解，加偏磷酸溶液沉澱幹擾物質，反相色譜分離，與標準品的保留時間比較定性，以峰面積外標法定量。
3 試劑和材料
註：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1 偏磷酸（HPO3）：分析純。
3.1.2 甲醇(CH3OH)：色譜純。
3.2 試劑配製
偏磷酸溶液(30.0g/L)：稱取30.0g偏磷酸，於裝有約600mL水的三角瓶中，在磁力攪拌器攪拌上溶解，轉移至1000mL容量瓶中，用水定容至1000mL，混勻。
3.3 標準品
蟲草素(C10H13N5O3)：純度≥98.0%。
3.4 標準溶液的配製
3.4.1蟲草素標準儲備溶液(0.5 mg/mL)：稱取標準品25mg於50ｍＬ容量瓶中，用水溶解並定容至刻度 ，搖勻。此溶液應貯存於-18°C 冰箱中。
3.4.2 蟲草素標準工作液：吸取蟲草素標準儲備溶液0.10mL、0.20mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0 mL 於 50.0 mL 容量瓶中，用水定容，得濃度為 1 mg/mL、2mg/mL、5mg/mL、10 mg/mL、20 mg/mL、50 mg/mL 的標準工作液，臨用時配製。
4 儀器設備
4.1 高效液相色譜儀： 附紫外檢測器（UV）。
4.2 天平:感量為 1 mg 和 0.1 mg。
4.3 超聲波清洗器。
4.4 離心機:轉速 ≥4000 r/min。
4.5 磁力攪拌器。
5 分析步驟
5.1 試樣製備
5.1.1 試樣處理
5.1.1.1 固體樣品：取20粒以上片劑或膠囊試樣進行粉碎、混勻，或取半固態試樣混勻（軟膠囊稱取內容物），準確稱取均勻試樣1g（可根據樣品中含量而定，精確至0.001g），置50mL容量瓶中，加水30mL，混勻，超聲震蕩30min，加入30.0g/L偏磷酸溶液（3.2）1.0mL，輕輕振蕩，加水稀釋至刻度，搖勻。樣品經0.45μｍ 濾膜過濾後進液相色譜分析。
5.1.1.2 液體樣品：準確吸取一定量搖勻後的試樣10 mL（可根據試樣含量而定）於50 mL容量瓶中，加水20mL，混勻，超聲震蕩30min，加入30.0g/L偏磷酸溶液（3.2）1.0mL，輕輕振蕩，加水稀釋至刻度，搖勻。樣品經0.45μｍ 濾膜過濾後進液相色譜分析。
5.2色譜參考條件
5.2.1 色譜柱：C18柱，4.6×250 mm, 5 μm或同等性能色譜柱。
5.2.2 柱溫：30 ℃
5.2.3 檢測波長：260 nm
5.2.4 流動相：甲醇-水=15:85
5.2.5 流速：1.0 mL/min
5.2.6 進樣量：10 mL
5.3 標準曲線的製作
將10 μL的標準系列各濃度溶液(3.4.2) ，注入液相色譜儀中，測得相應的峰面積或峰高， 以標準工作液的濃度為橫坐標，以峰面積或峰高為縱坐標，繪製標準曲線 (標準溶液液相色譜圖見附錄 A 中圖 A.1 )。
5.4 試驗溶液的測定
將 10 μL 的試樣待測液(5.1.1)注入液相色譜儀中，以保留時間定性，測得峰面積或峰高，根據標準曲線得到待測液蟲草素的濃度(樣品溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.2)。
6 分析結果的表述
試樣中蟲草素含量按式(1)計算:
Ci×V×100
Xi = ..........................................(1)
m×1000000
式中:
Xi——試樣中蟲草素的含量，單位為克每百克或克每百毫升(g/100g/g/100mL);
Ci——由標準曲線查得測定樣液中蟲草素的濃度，單位為微克每毫升(mg/mL);
V——被測定樣液的最終定容體積，單位為毫升( mL);
m——測定用試樣的量，單位為克或毫升( g或mL);
100——單位轉換;
1000000——單位轉換。
計算結果以重複條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，保留兩位有效數字。
7 精密度
在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10% 。
8 其他
當稱樣量為1 g，定容體積為 50 mL時，蟲草素定量限為0.0010 g/100g。