一、高效液相色譜儀檢測肉製品中胭脂紅著色劑含量的原理:
試樣中的胭脂紅經脫脂、鹼性溶液提取、沉澱蛋白質、聚醯胺粉吸附、無水乙醇+氨水+水解吸後,製成水溶液,過濾後用高效液相色譜儀測定,根據保留時間定性,外標法定量。
二、高效液相色譜儀檢測肉製品中胭脂紅著色劑含量的樣品處理:
1、提取:
稱取試樣5-10g,置於研缽中,加海砂少許,研磨混勻。吹冷風使試樣略為乾燥,加入石油醚50ml,攪拌、放置片刻,棄去石油醚,如此處理重複三次,除去脂肪,吹乾。
加入無水乙醇+氨水+水溶液提取胭脂紅,通過砂芯漏鬥抽濾提取液,反覆多次,至提取液無色為止。收集全部提取液至250ml錐形瓶中。
2、沉澱蛋白質:
在70℃水浴上濃縮提取液至10ml以下,依次加入1ml硫酸溶液和1ml鎢酸鈉溶液混勻,繼續70℃水浴加熱5min,沉澱蛋白質。取下錐形瓶,冷卻至室溫,用濾紙過濾,用少量水洗滌濾紙,濾液收集於100ml燒杯中。
3、純化:
將上述溶液加熱到70℃,將1-1.5g聚醯胺粉加少許水調成粥壯,倒入試樣溶液中,使色素完全被吸附。將吸附色素的聚醯胺粉,全部轉移至漏鬥中,抽濾,用70℃檸檬酸溶液,洗滌3-5次,然後用甲醇+甲酸洗滌3-5次,至洗出液無色為止,再用水洗至流出液呈中性。以上洗滌過程中要攪拌。
用無水乙醇+氨水+水溶液解吸3-5次,每次5ml,收集解吸液,蒸發至近幹,加水溶液並定容至10ml,經0.45um濾膜過濾後,待測。
三、高效液相色譜儀檢測肉製品中胭脂紅著色劑含量的測定:
1、液相色譜儀參考條件:
a)色譜柱:C18,150*4.6mm,5um。
b)流動相:甲醇和0.02mol/L乙酸銨溶液。梯度洗脫。
c)流速:1.0ml/min。
d)柱溫:30℃。
e)檢測出:508nm。
f)進樣量:20ul。
2、液相色譜儀測定:
分別將待測試樣溶液和標準工作溶液,注入液相色譜儀測定。
3、結果計算: