分析方法:乳製品中三聚氰胺的高效液相色譜檢測法

　　三聚氰胺(Melamine)是一種重要的三嗪類含氮雜環有機化工原料，主要用於生產三聚氰胺-甲醛樹脂，廣泛用於木材加工、塑料、塗料、造紙、紡織、皮革等行業，為白色晶體。三鹿奶粉事件引發了對三聚氰胺檢測的廣泛關注，國家質量監督檢驗檢疫總局和國家標準化管理委員會相繼發布了《原料乳與乳製品中三聚氰胺檢測方法》(GB/T22388-2008)和《原料乳中三聚氰胺快速檢測 液相色譜法》(GB/T22400-2008)的國家標準。本文參考了以上標準並進行配製條件優化，建立了液相色譜檢測法，前處理簡單，檢測限、精密度、重現性以及回收率均符合國家標準。

　　1 實驗部分

　　1.1 儀器與試劑

　　LC1620高效液相色譜儀(含UV1620紫外-可見檢測器1臺，P1620高壓恆流泵1臺，上海舜宇恆平科學儀器有限公司);AT-330色譜柱溫箱(天津奧特賽恩斯儀器有限公司);FA2004分析天平(上海舜宇恆平科學儀器有限公司);TGL-16G-A離心機(上海安亭科學儀器廠);三聚氰胺標準品(>99%，上海安譜);辛烷磺酸鈉(色譜純，北京百靈威);磷酸(分析純)、乙腈(色譜純，美國Tedia)、純淨水(杭州娃哈哈)。

　　1.2 標準品溶液配製

　　精密稱取三聚氰胺標準品，溶於50%的甲醇水溶液，配製稱1.422mg/ml的標準儲備液，於4℃避光保存。根據實驗需要，用流動相逐級稀釋成適當濃度的標準工作液。

　　1.3 樣品前處理

　　稱取2g酸奶樣品與50ml具塞離心管中，加入乙腈：水=50：50混合溶液15ml，充分混勻後超聲提取15min。取提取液250ul，加入0.1mol/l鹽酸750ul，混勻，以12000r/min離心5min，取上清液，0.22um濾膜過濾，作為HPLC測定溶液。

　　1.4 色譜條件：

　　色譜柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)

　　流動相：乙腈/緩衝鹽=15/85(緩衝鹽：10mM辛烷磺酸鈉水溶液，含0.1%磷酸)

　　流速：1.0ml/min

　　波長：240nm

　　溫度：40℃

　　進樣量：20μl

　　2 實驗結果

　　2.1 精密度實驗

　　取濃度為0.569μg/ml三聚氰胺標準工作液，按上述色譜條件，連續進樣5次，以各成分峰面積計算RSD(%)，所得結果如表1所示：保留時間相對標準偏差(RSD)為0.23%，峰面積RSD為0.57%。

表1 精密度實驗

NO.	Retention time（min）	Peak High	Peak Area
1	11.933	289	4216.8
2	11.990	290	4264.2
3	11.928	287	4246.0
4	11.927	287	4242.8
5	11.923	284	4218.6
RSD(%)	0.23	0.82	0.57

　　圖1 三聚氰胺標準品

　　2.2 標準曲線

　　配置濃度分別為0.142、0.284、0.853、1.422、7.110、14.220μg/mL的三聚氰胺標準工作液。將以上6種標準工作液在上述色譜條件下按濃度由低至高進樣。用最小二乘法以對照品濃度(橫坐標X軸，µg/ ml)對峰面積(縱坐標Y軸)進行線性回歸，求算標準曲線。

　　2.2 加樣回收率和重現性實驗

　　取已知三聚氰胺含量的酸奶樣品，加入一定量的標準儲備液，按「樣品前處理」 操作，平行製備3份，得到樣品溶液後按上述色譜條件進樣分析，得到加樣回收率及重現性結果，見表2。

　　表2 加樣回收率和重現性(n=3)

Spiked(mg/kg)	Recovery(%)	RSD(%)
35.0	87.2	1.37

圖2 空白酸奶樣品

　　

圖3 加標酸奶樣品

　　2.2 檢測限及定量限

　　依據噪聲值，按3倍信噪比，計算其理論檢出限，為0.221 mg/kg;按10倍信噪比，計算其定量限，為0.738 mg/kg。

　　3 結論

　　本方法優化了高效液相色譜法檢測乳製品中三聚氰胺測定方法，該方法簡化了前處理步驟，易於操作，線性關係良好，有較好的精密度和重現性，回收率滿足國家標準的要求，檢出限和定量限也符合目前三聚氰胺的檢測要求。

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