此法培育櫻桃砧木苗,不僅繁殖速度快,而且利於保護其優良特性。其方法步驟如下。
一、外植體消毒與接種
取田間當年新梢或一年生枝條,去葉,用自來水將表面刷洗乾淨,剪成一芽一段,放入乾淨燒杯,進入超淨工作檯消毒,常用消毒劑為70%酒精,0.1%新潔爾滅,0.1%升汞(HgCl),三者可配合使用。 先用70%酒精浸泡2~4秒,再放到0.1%新潔爾滅中15分鐘,再用0.1%升汞消毒5~10分鐘,其間用無菌水衝洗2~3遍,然後剝去葉柄、鱗片,取出帶數個葉原基的莖尖接入培養基,半包埋。櫻桃培養基多採用MS培養基,附加BA0.1~1.0毫克/升+IBA0.3~0.5毫克/升,蔗糖30克/升。
二、初代培養和繼代培養
莖尖接種後放到培養條件為光照3000勒克斯8~10小時、暗14~16小時、溫度26℃±2℃的環境中,經大約2個月的初代培養,每個生長點可長到2~3釐米長,並已形成多個芽叢,這時便可進行繼代培養,將每個芽叢切割下來,轉接到培養基上進行增殖培養。其後,大約每25天進行一次繼代培養,每次芽的增殖數約為4~6倍。
三、生根培養
上述增殖培養的芽長到3釐米左右時,即可用於生根。生根培養基多採用1/2MS培養基+IBA0.1~0.5毫克/升。有的種或品種需加生物素或IAA或NAA等,蔗糖20毫克/升。 接種在生根培養基上培養20天左右,芽的基部即可長出根,成為完整苗。生根苗長到3~5釐米高時即可鍛鍊移栽。
四、移栽
組培苗在人工培養條件下長期生長,對自然環境的適應性較弱。移栽前需要一個過渡階段,即鍛鍊。將培養瓶移至自然光下鍛鍊2~3天,打開瓶口再鍛鍊2~3天後,取出生根的砧木苗,先洗淨根系上的培養基(避免培養基感染雜菌致苗死亡),再移入基質營養缽或穴盤中,將移栽後的砧木苗放在有塑料膜覆蓋的溫室或大棚中,保持適宜的溼度和溫度。溫度保持在20~28℃,溼度保持80%~90%,光照強度為3500~4000勒克斯。鍛鍊一個月左右,5月下旬至6月上中旬即可移入田間。