2020版《中國藥典》四部高效液相色譜法修訂了,你知道嗎?

2020版藥典修訂工作正在如火如荼進行中，那你知道高效液相色譜法新增和修訂了哪些內容嗎？與2015版藥典有哪些不同嗎？在這裡就把最新修訂的內容進行總結歸納。

一、檢測器新增了電霧檢測器

2020版藥典新增了電霧檢測器，大家對電霧檢測器了解嗎？

電霧式檢測器（CAD）是一種新型通用型液相色譜檢測器，具有較寬的動態監測範圍、較高的靈敏度和重複性、不依賴與化學結構的信號響應一致性、應用廣泛和操作簡捷等優點，應用於中性、酸性、鹼性及兩性物質等，特別是無紫外吸收、非揮發性或半揮發性物質的檢測。

與ELSD相比，CAD具有更高的檢測靈敏度、更好的日內和日間重複性和更寬的線性範圍。很多ELSD無法檢測到的雜質，在CAD上具有較好的響應。與ELSD相比，難揮發性化合物的CAD響應與分析物的理化性質無關，在進入CAD的流動相組成不變的情況下，進樣量相同的不同化合物具有相同的CAD響應。換言之，CAD可用已知化合物的線性曲線定量未知化合物。此外，CAD做化合物純度分析所得數據更接近樣品的真實組成。

與UV相比，CAD的響應不受化合物紫外吸收基團的影響，半揮發和難揮發的化合物都能在CAD上具有較好的響應，可以檢測UV無法檢測到的弱紫外吸收化合物。

圖1、電霧檢測器結構及工作原理

電霧式檢測器有如下主要特點：

?基於該檢測器的設計原理與結構，該檢測器總體上靈敏度高，如在分析葡萄糖、蔗糖和乳糖時，能檢測到0.5ng的柱上樣量；

?更高的響應一致性，如對24種化合物在相同色譜條件下分別直接進樣1μg（不接色譜柱），其響應的峰面積的RSD值僅為10.7%；

?動態檢測範圍寬，達3-4個數量級；

?應用廣泛，能分析小分子、大分子化合物，如胺基酸、蛋白、聚合物等；

?使用操作直觀簡單，維護十分簡便，工作流速0.01-2.00 ml/min，兼容Micro-LC和UHPLC。

USP收錄的脫氧膽酸（USP40 NF35 S1）和EP收錄的釓布醇（Ph. Eur. 04/20/16:2735）兩個品種，含量測定和有關物質測定均採用電霧檢測器。

二、對藥典方法品種正文項下規定的色譜參數調整做了詳細規定

應評價色譜參數調整對分離和檢測的可能影響，必要時，調整的方法應進行相應的方法學驗證。調整後，系統適用性應符合要求，且色譜峰出峰順序不變。

若減小進樣體積，應保證檢測限和峰面積的重複性；

若增加進樣體積，應使分離度和線性關係仍滿足要求。

調整梯度洗脫色譜參數時應比調整等度洗脫色譜參數時更加謹慎，因為此調整可能會使某些峰位置變化，造成峰識別錯誤，或者與其他峰合併。

三、新增了測定法項下定性分析項

明確規定了常用的定性方法主要有但不限於以下幾種：

1、利用保留時間定性

保留時間（retention time）tR被定義為被分離組分從進樣到柱後出現該組份最大響應值時的時間，也即從進樣到出現某組分色譜峰的頂點時為止所經歷的時間，常以分（min）為時間單位，用於反映被分離的組分在性質上的差異。通常以在相同的色譜條件下待測組分的保留時間與對照品的保留時間是否一致作為待測成分定性的依據。

在相同的色譜條件下，待測成分的保留時間與對照品的保留時間應無顯著性差異；兩個保留時間不同的色譜峰歸屬於不同化合物，但兩個保留時間一致的色譜峰有時未必可歸屬為同一化合物，在作未知物鑑別時應特別注意。

若改變流動相組成或更換色譜柱的種類，待測成分的保留時間仍與對照品的保留時間一致，可進一步證實待測成分與對照品為同一化合物。

當待測成分（保留時間tR,1）無對照品時，可以樣品中的另一成分或在樣品中加入另一成分作為參比物（保留時間tR,2），採用相對保留時間（RRT）作為定性（或定位）、校正因子計算含量的方法。在品種項下，除另有規定外，相對保留時間以未扣除死時間的非調整保留時間按下式計算。

若需以扣除死時間的調整保留時間計算，應在相應的品種項下予以證明。

2、利用光譜相似度定性

化合物的全波長掃描紫外-可見光區光譜圖提供一些有價值的定性信息。待測成分的光譜與對照品的光譜的相似度可用於輔助定性分析。

二極體陣列檢測器可得到更多的信息，包括色譜信號、時間、波長的三維色譜光譜圖，既可用於輔助定性分析，還可用於峰純度分析。

3、利用質譜檢測器定性

利用質譜檢測器提供的色譜峰分子質量和結構的信息進行定性分析，可獲得比僅利用保留時間或增加光譜相似性進行定性分析更多的、更可靠信息，不僅可用於已知物的定性分析，還可提供未知化合物的結構信息。