Northerm雜交是用來檢測真核生物RNA的量和大小的實驗方法

2021-01-11 毛毛蟲的小天地

Northerm 雜交是用來檢測真核生物RNA的量和大小及估計其豐度的實驗方法。它可以從大量的RNA樣本中同時獲得這些信息,在這點上,是其他實驗方法所無法比擬的。Northern雜交是研究真核細胞基因表達的基本方法。

這種方法- -經發 表(Alwine et al. 1977,1979)就成為分子生物學基本操作方法的一部分。在以後的30年中,雖然對該方法作出了許多的變動和改進(如Kroczek 1993),然而,Northern 分析的基本步驟沒有改變,包括:

●完整mRNA的提取

●根據RNA的大小,通過變性瓊脂糖凝膠或聚丙烯醯胺凝膠電泳對RNA進行分離

●將RNA轉移到固相支持物上,在轉移的過程中,要保持RNA在凝膠中的相對分布

●將RNA固定到固相支持物上

●固相RNA與探針分子(與目的序列互補)雜交

●除去非特異結合到固相支持物上的探針分子

●對特異結合的探針分子的圖像進行檢測、捕獲和分析

對以上過程中的每一步都有幾種選擇,新的方法在文獻中也不斷出現。如果想結合每步的精華,尋找適合於各種條件的最好的方法也許是不可能的。然而,方案10~14描述的方法是適合於各種條件的非常好的方法。

%根據RNA的大小對其進行分離根據RNA的大小,利用變性瓊脂糖凝膠或聚丙烯醯胺凝膠電泳對其進行分離是Northern雜交的第一步。在早期,氫氧化甲基汞也曾得到一定程度的流行,尤其是勇敢而魯莽的實驗者。

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