曹建國1 許棟2 張和軍3
種公豬精液在採集、稀釋液配製和精液稀釋過程中，會因外界環境或操作疏忽而使精液或稀釋液受到某些病原微生物的汙染，影響稀釋精液的質量和保存時間。靚精為一種精液淨化保護劑，含5% 聚維酮碘，能抑制或殺滅病原微生物，減少病原微生物對精子質量的影響，提高精子活力，延長保存時間。本試驗在公豬精液中加入靚精，通過檢測稀釋精液在保存期間的精子活力和精子畸形率，觀察靚精對稀釋精液保存質量的影響。
1 材料和方法
1.1 精液和藥物
1.1.1 精液：採自上海祥欣畜禽有限公司種公豬站的3頭杜洛克生產公豬，耳號分別為D119903、D18209、D59401。
1.1.2精液稀釋液：全能健Z（商品名），豬精液稀釋保存劑，日本全能工業株式會社提供技術（中牧南京動物藥業有限公司生產，生產批號14043515）。
1.1.3 靚精（商品名）：成都美強獸醫技術服務有限公司提供（四川省川龍動物藥業有限公司生產，生產批號20130401）。
1.2 主要儀器設備
密度儀SDM1、雙目顯微鏡SDE6500、電子天平、半自動包裝機、恆溫冰箱、偉力彩色豬精子分析系統。
1.3 精液處理方法
同一公豬精液分為靚精處理組和常規處理組兩個處理組，每個處理5個重複。靚精組在精液稀釋劑中按比例加入靚精產品，常規組不加入。精液稀釋劑需提前24h配製好。採精後進行精液密度檢測，將新鮮精液與精液稀釋劑按0.5億/ml的標準進行稀釋，分包後靜置30min，防震保溫氣泡膜逐袋包裹置於泡沫保溫箱中，內置300ml冰袋，使溫度保持在17℃左右，由專業物流公司送實驗室檢測。
2 測試結果
2.1 精子活力
用移液器取精液4µl置於精子計數板上，並加蓋專用玻片。每個樣品觀察3個視野，並記錄檢測值。連續觀察5天。
經檢測，靚精處理後的精液，在恆溫17℃冰箱保存條件下的精液，第1天精子活力84.58%、第2天78.75%、第3天76.25%、第4天66.25%、第5天63.33%；常規組精液，第1天精子活力80.00%、第2天73.75%、第3天70.00%、第4天59.58%、第5天53.33%（見圖1），結果表明靚精組的精子活力優於常規組，說明添加靚精能延長稀釋精液的保存時間。
圖1 連續保存天數的精子活力變化
2.2 精子畸形率
精子畸形率的檢測步驟為：
2.2.1 抹片：將樣品均勻地塗布於載玻片上，每樣品製作兩個抹片；
2.2.2 固定：在已風乾的抹片上滴1.0ml-2.0ml中性福馬林固定液，固定15min後用水衝去固定液，吹乾或自然風乾；
2.2.3 染色：姬姆薩染色1.5h後用水衝去染液，晾乾待檢；
2.2.4 鏡檢：將製備好的抹片在顯微鏡下觀察，每個抹片觀察200個以上的精子（分左右兩個區），取兩片的平均值。
測試結果顯示，靚精組精子畸形率第1天6.53%、第2天8.39%、第3天8.44%、第4天8.88%、第5天9.33%，保存5天期間共上升2.8個百分點，平均每天上升0.56個百分點；常規組精子畸形率第1天6.22%、第2天8.66%、第3天9.27%、第4天9.27%、第5天10.21%，保存5天期間共上升3.99個百分點，平均每天上升0.8個百分點（見圖2）。結果表明，靚精組的精子畸形率低於常規組，添加靚精能降低精子畸形率。
圖2 連續保存天數的精子畸形率變化
3 討論與小結
3.1 靚精組能保持較長時間的有效精子活力，延長稀釋精液的保存時間。相比較，靚精組從保存第1天后至第5天，精子活力分別比常規組提高5.73%、6.78%、8.93%、11.19%和18.75%，差異顯著（P<0.05）。結果顯示，靚精組在第5天精子活力仍達63.33%，而常規組在第4天已低於60%，不能用作配種用。因此，在恆溫17℃冰箱保存條件下，豬精液中添加靚精，保存時間可從3天延長到5天，為應用人工授精的豬場提供了延長保存時間的新途經。
3.2 靚精組能降低精子畸形率，提高精子的保存質量。相比較，靚精組除第1天精子畸形率高於常規組4.91%，從保存第2天后至第5天間，精子畸形率分別比常規組降低5.73%、6.78%、8.93%和11.19%；保存5天間靚精組精子畸形率比常規組平均降低5.88%，顯示公豬精液中添加靚精能降低精子畸形率，從而更有效地保護精子。
綜合來看，在種豬精液日常生產中，應用「靚精」精液淨化保護劑，不失為一種延長精液保存時間和保護精液質量的新方法。