豆芽是餐桌上比較常見的一種蔬菜,很多人都喜歡吃,但是「毒豆芽」事件層出不窮,導致人們吃豆芽時又多了幾分顧慮。
據一些科研文獻的報導,有些植物生長調節劑對動物可能存在一定的毒性,但是這些毒理學實驗研究所使用的植物生長調節劑劑量相對較高。2015年4月國家食品藥品監督管理總局、農業部和國家衛生計生委聯合發布了關於豆芽生產過程中禁止使用6-苄基腺嘌呤等物質的公告(2015 第11號),明確表示6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸鈉、赤黴素等作為低毒農藥登記管理並限定了使用範圍,豆芽生產不在可使用範圍內,明確規定豆芽生產和經營過程禁止使用上述物質。
安譜實驗根據目前主流的檢測方法,開發出自己的MCS 專用小柱,利用小柱淨化,LC/MSMS 檢測的方法,對常見的10 種植物生長調節劑進行測定,操作簡便,回收率高。
一、樣品前處理
1. 試樣的製備和保存:
將待測樣品粉碎混勻待用, 稱取試樣後將剩餘試樣放置於-20℃冰箱中保存備用,儘快分析。
2. 提取:
稱取試樣5.00g 於50ml 離心管中,加標0.5mL(1ppm), 加入20μL甲酸,再加入20mL 乙腈,漩渦混勻1min左右,然後超聲5min, 超聲結束冷卻後10000rpm 離心機離心5min,上清液轉移至新的 50ml離心管中,然後加入2.0gNaCl( 使其飽和有結晶),漩渦混勻2min 後10000rpm 離心2min,吸出2mL 乙腈相入試管中,50℃下用氮氣吹乾,加入0.2mL 甲醇漩渦溶解,再加入3mL 40mmol/L 的鹽酸溶液混勻,轉移至離心管內,10000rpm 離心機離心5min,分出上清液待淨化。
3.SPE 過程:
先用 5mL 甲醇、5mL 水、5mL 40mmol/L 的鹽酸溶液活化小柱(SBEQ-CA71AP),活化結束後, 將提取液轉移到小柱中,待樣品過柱後,用 5ml 水淋洗除雜,真空抽乾 5min,加入 5mL 甲醇洗脫收集於 15ml離心管內,抽乾得洗脫液 1;再用 5mL5% 氨化甲醇洗脫,收集於15ml離心管內,得洗脫液 2;洗脫液 1 和 2 在50℃下用氮氣吹乾,分別加入0.1mL 甲醇超聲溶解殘留物,再加入 0.9mL 10% 甲醇/ 水溶液混勻,過 0.22μm 濾膜後待 UPLC-MS/MS 分析。洗脫液 1 用於分析GA3,2,4-D,4-CPA,IAA,IBA( 赤黴素、2,4-D、4- 氯苯氧乙酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸)5 種植物生長調節劑,洗脫液 2 用於分析LBN,SBL,6-BA,DXZ,6-KT( 氯吡脲、噻苯隆、6-BA、多效唑、6-KT)5 種植物生長調節劑。
二、色譜條件
液質聯用色譜質譜儀:ACQUITY UPLC 超高效液相色譜儀 ( 美國Waters 公司),串聯AB 5500 型三重四極杆質譜儀( 美國AB SCIEX 公司),配電噴霧離子源 (ESI)
液相條件:
色譜柱: Athena UPLC C18(2.1*50mm,1.8um)
流動相: A 乙腈(%) B 5mM/L 乙酸銨溶液(%)
流速:0.45mL/min
柱溫:30℃
進樣量:1ul
採集模式:MRM
質譜參數:
三、實驗譜圖
▲豆芽基質吲哚乙酸50ppb加標
▲豆芽基質赤黴素 50ppb加標
▲豆芽基質吲哚丁酸50ppb 加標
▲豆芽基質2,4-D 50ppb 加標
▲豆芽基質多效唑50ppb 加標
▲豆芽基質氯吡脲 50ppb 加標
▲豆芽基質6-KT 50ppb 加標
▲豆芽基質6-BA 50ppb 加標
▲豆芽基質4- 氯苯氧乙酸 50ppb 加標
▲豆芽基質噻苯隆 50ppb 加標
四、實驗數據
五、實驗耗材
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