實際上HPLC色譜柱的填裝壓力比最大使用壓力高很多(通常會高2倍)。如果裝柱時使用了恰當的勻漿劑,並且分配一定的時間使柱床穩定,一支填裝良好的色譜柱是完全可以雙向使用的。
液相色譜柱上基本都有->標誌,表示流動相的流動方向,有的在色譜柱上印有「Nerver Lot Flow in the Opposite Direction」字樣,翻譯成「決不能反衝」的意思,色譜柱可以反衝嗎、色譜柱能不能反衝的問題爭議很大,但在我們工作中,用色譜柱反衝技術修複色譜柱可以收到柱效提高、柱效恢復的效果。
一、分析胺基酸的離子交換柱,使用一段時間反柱效明顯下降,用NaOH活化,達不到要求,但用NaOH反衝活化可迅速恢復柱效。
二、色譜柱使用一段時間後柱效下降,此時可拆下柱入口端螺帽,去掉1-2mm被汙染填料,再用相同填料填滿,然後用流動相反衝一下,可使柱效恢復,因反衝可以改善柱頭死空間。
三、因反衝可把沉積在過渡板上的細微顆粒衝走,有時也可用反衝技術使柱壓降低。
反向使用色譜柱有一個例外,就是生產商在色譜柱的進樣端使用了孔徑更大篩板的情況,反向使用可能會將填料從柱床衝出。如果製造商在柱的入口處使用的是高孔隙率的玻璃料,那麼將柱反衝的話,可能會將柱填料從填充床上衝洗掉。
色譜柱在工廠填裝時,出口端的篩板孔徑必須比色譜柱中最小顆粒的粒徑還要小。譬如,色譜填料平均粒徑是5μm,粒徑分布範圍是3-7μm,出口端篩板孔徑必須小於3μm,使填料沒有可能從柱床跑到色譜柱篩板外面。
大多數生產廠家選擇的篩板孔徑是2μm。 至於某些廠家兩端的柱篩板孔徑不一樣,一般是進樣端大些,出樣端小些。因此,一些製造商會在柱子標籤處放置一個箭頭指示,表明必須僅在一個方向上使用。可以肯定有這種可能性,所以一個色譜工作者應該好好閱讀色譜柱手冊或說明書,或與製造商確定這根色譜柱是否可以反衝。