HPLC和UHPLC 色譜柱的十大誤區

2021-03-04 易科學



實際上HPLC色譜柱的填裝壓力比最大使用壓力高很多(通常會高2倍)。如果裝柱時使用了恰當的勻漿劑,並且分配一定的時間使柱床穩定,一支填裝良好的色譜柱是完全可以雙向使用的。

液相色譜柱上基本都有->標誌,表示流動相的流動方向,有的在色譜柱上印有「Nerver Lot Flow in the Opposite Direction」字樣,翻譯成「決不能反衝」的意思,色譜柱可以反衝嗎、色譜柱能不能反衝的問題爭議很大,但在我們工作中,用色譜柱反衝技術修複色譜柱可以收到柱效提高、柱效恢復的效果。

一、分析胺基酸的離子交換柱,使用一段時間反柱效明顯下降,用NaOH活化,達不到要求,但用NaOH反衝活化可迅速恢復柱效。

二、色譜柱使用一段時間後柱效下降,此時可拆下柱入口端螺帽,去掉1-2mm被汙染填料,再用相同填料填滿,然後用流動相反衝一下,可使柱效恢復,因反衝可以改善柱頭死空間。

三、因反衝可把沉積在過渡板上的細微顆粒衝走,有時也可用反衝技術使柱壓降低。

反向使用色譜柱有一個例外,就是生產商在色譜柱的進樣端使用了孔徑更大篩板的情況,反向使用可能會將填料從柱床衝出。如果製造商在柱的入口處使用的是高孔隙率的玻璃料,那麼將柱反衝的話,可能會將柱填料從填充床上衝洗掉。

色譜柱在工廠填裝時,出口端的篩板孔徑必須比色譜柱中最小顆粒的粒徑還要小。譬如,色譜填料平均粒徑是5μm,粒徑分布範圍是3-7μm,出口端篩板孔徑必須小於3μm,使填料沒有可能從柱床跑到色譜柱篩板外面。

大多數生產廠家選擇的篩板孔徑是2μm。 至於某些廠家兩端的柱篩板孔徑不一樣,一般是進樣端大些,出樣端小些。因此,一些製造商會在柱子標籤處放置一個箭頭指示,表明必須僅在一個方向上使用。可以肯定有這種可能性,所以一個色譜工作者應該好好閱讀色譜柱手冊或說明書,或與製造商確定這根色譜柱是否可以反衝。

 

相關焦點

  • 如何延長液相色譜柱的使用壽命
    一、使用前準備1、使用前認真閱讀色譜柱的說明書,了解色譜柱的種類,選用合適的色譜柱。在選用色譜柱時,應充分考慮所分析樣品的極性大小、化合物的種類數量、結構特徵。根據化合物的性質,選擇合適的色譜柱和分析條件。
  • HPLC使用保養與故障排查!
    甲醇和乙腈在高效液相色譜分析法中常常被用來配製流動相。高效液相色譜法中常用的試劑最好是高等級的專用試劑,如色譜純試劑。在要求不太嚴格時,優級純甚至分析純的試劑也能用。高效液相色譜分析法中常用的是紫外檢測器,因此,從降低基線噪音和提高分析靈敏度上來考慮,應該使用紫外吸收小且雜質含量少的色譜純試劑。配製好的流動相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。
  • 色譜技術叢書-高效液相色譜方法及應用(第三版)
    亞-2μm TPP(1.7μm)和亞-2μm SPP(1.3~1.7μm)的出現,使色譜柱的柱效由200000 塔板/m 提升到500000 塔板/m,為超高效液相色譜(UPLC)或超高壓液相色譜(UHPLC)的快速發展奠定了堅實的基礎,也為解決複雜樣品的分析任務開闢了新思路。
  • HPLC分類、工作原理及其儀器組成
    根據流動相和固定相的極性不同,HPLC可以分為正相色譜和反相色譜。正相高效液相色譜:色譜柱中的固定相是由矽膠、氧化鋁等極性化合物組成。當色譜運行時,由於樣品中的極性化合物對固定相有較強的親和力,使它們在色譜柱中的保留時間比非極性化合物長,因此非極性化合物最先被洗脫出來。
  • 【離子色譜】水中碘化物的離子色譜測定法
    本標準適用於地表水和地下水中碘化物的測定。樣品隨淋洗液進入陰離子分離柱,分離出碘離子(I-),用電導檢測器檢測。
  • 離子色譜法--色譜世界
    離子色譜儀 ionchromatograph 離子色譜分析所使用的專門儀器。它和一般的液相色譜儀的基本構造和工作原理一樣,最基本的單元組件也是高壓輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和數據處理系統(記錄儀、積分儀或色譜工作站)。此外,還可根據需要配置流動相在線脫氣裝置、梯度洗脫裝置、自動進樣系統、流動相抑制系統、柱後反應系統和全自動控制系統等。
  • HPLC使用注意事項及柱子使用經驗之談
    」、「高速液相色譜」、「高分離度液相色譜」、「近代柱色譜」等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支,以液體為流動相,採用高壓輸液系統,將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩衝液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內各成分被分離後,進入檢測器進行檢測,從而實現對試樣的分析。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用。
  • 【乾貨】色譜峰分叉的原因你知道嗎?
    1、色譜柱汙染在開始時沒問題,在使用一段時間後出現這個問題,可能是由於汙染引起的。這時需要對色譜柱加強衝洗,即使用比方法流動相更強的溶劑衝洗色譜柱。圖1中使用純乙腈衝洗色譜柱消除了3號峰分叉問題。這種問題一般在使用小體積色譜柱是表現更為明顯,所以色譜柱方法從常規250mm或150mm長色譜柱轉化到體積較小的快速分析柱時,進樣量要按照柱體積的減小的比例而減小。6、色譜柱塌陷由於柱塌陷引起的峰分叉,很難修復。如果流動相pH>7或在色譜柱pH耐受範圍臨界點附近長時間使用,是比較容易造成矽膠填料溶解塌陷。
  • 深度講解 | RP-HPLC中的離子對試劑
    離液鹽對分析物的保留產生與傳統IPRs類似的效果,但其中的機理卻有所不同;與傳統的IPRs類似,不同類型的離液鹽會對分離的選擇性、效率和重複性有不同的影響,但與傳統的IPRs傾向於強烈吸附在固定相上並會對色譜柱性能產生不可逆的改性不一樣的是離液鹽由於親水性強,當使用後容易被清洗出色譜柱而不產生明顯殘留。
  • 8個關於液相色譜精選問答
    c.色譜柱也需要排查,是否恆溫,是否有漏液?液相色譜中影響峰擴散的有那些因素?與氣相色譜相比,有哪些不同之處?解答:氣相色譜與液相色譜在速率理論方程上的差異主要是由於氣體與液體的性質差異造成的。液體的黏度比氣體大約100倍,表面張力大約10000倍,密度大約1000倍;氣體還具有高壓縮性係數。
  • 高選擇、高靈敏、高通量——色譜填料發展的方向
    ,色譜分離的核心是色譜柱,而色譜分離材料則是色譜柱的靈魂。目前,我國色譜填料產業化關鍵技術基本來源於國外,我國高端色譜分離材料製備關鍵技術還有一定差距,色譜填料和色譜柱嚴重依賴進口,自主研製高效色譜「芯」至關重要。」色譜分離新材料、新技術迪馬科技副總裁兼全球技術總監李廣慶在其報告中介紹,新型色譜分離材料主要有四大類。
  • 玩轉IC,離子色譜使用、維護及保養要點匯總
    離子色譜在檢測陰陽離子方面成績顯著,因此許多實驗室都配有離子色譜儀。為了大家能更好地使用它,專門整理了這篇離子色譜使用、維護及保養手冊,希望幫助你在使用離子色譜儀的過程中有所助益。首先什麼是離子色譜?離子色譜 (Ion Chromatography)是高效液相色譜(HPLC)的一種,是分析陰離子和陽離子的一種液相色譜方法。
  • 悲催的真人真事,HPLC使用這些坑你躲過了嗎?
    當反相填料色譜柱使用接近100%的水為流動相時,有時會發生分離能力突然喪失即被分析物質保留明顯降低或完全不保留的現象,這就是疏水坍塌。此現象是由流動相不浸潤固定相表面而致。碳長鏈(常見的有C18,C30)在有機相中是呈舒展的毛刷狀的,被測物色譜保留的作用力主要是和非級性的烷基長鏈的作用,所以含碳量高即烷基長鏈的C數和健合密度高,其色譜保留就強。但烷基長鏈長時間在水中,由於水的表面張力作用,會擠壓烷基長鏈使他們聚集或蜷縮於矽膠表面,其其表觀表面積大大減少,導致色譜無保留行為  。
  • ​實驗裡常用的乙腈和甲醇在色譜分析中的區別
    乙腈(ACN)和甲醇(MeOH)是在反向色譜柱方法開發中廣泛使用的兩種常見溶劑。所以,除了知道乙腈比甲醇有更高的洗脫能力這一事實外,色譜分析人員還應該知道其他的特性嗎?讓我們來討論一些所有色譜專家都應該知道的問題。首先,對流動相溶液的準備提出幾點意見。
  • 藥典應用 | 單、雙硬脂酸甘油酯的分子排阻色譜方案
    色譜條件與系統適用性試驗 用苯乙烯-二乙烯基苯共聚物為填充劑(7.8mm×30cm,5μm的兩根色譜柱串聯);以四氫呋喃為流動相;示差折光檢測器。三甘油酯、雙甘油酯、單甘油酯與甘油依次出峰。雙甘油酯峰與單甘油酯峰的分離度應符合要求,雙甘油酯峰與三甘油酯峰的分離度不得小於1.0。
  • 五種氣相色譜採樣技術,一篇講完
    在色譜學堂氣相系列第一期,我們簡單的介紹了氣相色譜的基本原理和主要構造。
  • 金鑑材料分析 凝膠滲透色譜 可靠性LED檢測實驗室 LED失效分析
    一、基本原理 1.分離原理 凝膠具有化學惰性,它不具有吸附、分配和離子交換作用。讓被測量的高聚物溶液通過一根內裝不同孔徑的色譜柱,柱中可供分子通行的路徑有粒子間的間隙(較大)和粒子內的通孔(較小)。
  • 高氯酸鹽在反相色譜中與烷基磺酸鹽的區別
    所以,高氯酸加入的反相色譜保留行為,認為是對離子的分配過程(普通反相機理——分配色譜)。因此,高氯酸的濃度與組分的保留行為(高氯酸濃度和保留因子的曲線)沒有折線點(折點/拐點),隨著高氯酸濃度的增加,保留因子k逐漸保持不變。而且,高氯酸的體系不拘泥於有機相的濃度,保留行為與不因為有機相而改變。
  • 六種常見液相分離方法基本原理和具體案例分享——反相色譜
    上一篇跟大家分享了正相色譜的基本原理和具體方法應用案例。今天的主題是反相色譜。1.
  • 氣相色譜進樣應該注意的一些問題
    氣相色譜進樣,就如同手動醫院裡的護士打針,有的可以讓患者在不知不覺中完成了注射,而有的則會讓患者感到痛苦。氣相色譜進樣的好壞,直接影響著分析的結果。本文克萊克特就來為大家分析氣相色譜進樣應該注意的一些問題。(1)注射速度。