細胞周期的結果怎麼看?

2021-02-21 果子學生信
果子導讀

這篇本該是昨天發的,結果我給睡著了,夜裡3點鐘起來編輯。
終於,終於,這一戰馬上就結束,我們也會回歸正常的生活。

寫標書這個事情,主要看見識。假如我們從來沒見過一份中了的標書,有多大希望一寫就中呢。從這點上說來,科研處絕對是個值得駐紮的地方,那麼多歷年中了的標書放在那裡,本身就是藏經閣。只不過,不是誰都可以進去看真經。
而國自然的經驗交流,歷來都是閉門的。有誰會原意把這吃飯的本事抖落人間呢。
高師姐這段時間真是開掛,徒手搭建了一個大項目,但是也沒有把經驗藏著,止不住地往外放,靜待花開吧。

今天發現已經兩周沒有跟大家分享了。這兩周是標書日,每天都在瘋狂的寫標書,改標書。為了每天精神十足,我採取了低碳水、低糖、間斷輕斷食飲食,也就是俗話說的每天用點點飲食吊命,長期處於一個半飢餓狀態。總體效果還不錯,每天精神還挺好。另外一個好處就是在這期間成功瘦了10斤。今天終於把標書交出去了,瞬間精氣神就散了(果子:真的是這種感覺)。趁著還有一些精神,給大家分享分享。

這是我第一次寫標書(果子:怎麼評論呢,類似於強哥說,沒開過公司,可一上來就是大的),在寫標書的整個過程當中,雖然被罵得很慘,但還是學到了很多東西。下面給大家分享分享,希望有所幫助。

定主題

寫標書,需要先把主題給定下來,也就是你的研究的分子是什麼,有可能是一個蛋白,有可能是一個基因,有可能是一個信號通路,也有可能是一個非編碼RNA。
其次要定的是這個分子在什麼疾病或者什麼細菌啊病毒啊中的作用,標誌物啊、治療靶點啊什麼的。
再次,它是通過什麼途徑導致的,也就是信號通路啊、自噬啊、衰老啊什麼的。
一般把主題定好後,就比較好些了。

立論依據

立論依據是最難寫的,我見證了在我搭建的沒什麼邏輯的簡陋小屋基礎上,我的導師是怎麼一步步把它變成超級豪華大house的。我們前前後後修改了54次。中間請了不同的人幫我們看標書,給出意見。第一次別人給的意見是我們這個都不像一個標書的樣子,更像是寫的文章。然後又一環一環的扣,一個個問題之間的邏輯,擺放的先後順序把每個大塊擺好,再在每一大塊裡面看每一句話的前後順序,之間的邏輯性。最後再看怎麼樣表述讓文字看上去比較高大上(果子:有些人就是有這樣的能力)。前面這些還是我比較enjoy的。這以後我每天都有好幾次要發火,要生自己的氣的時候。就是整個文字前後的語言用法要consistent,標點符號要注意,不能口水話。。。。。。語言要簡潔。我以前讀高中的時候,作文擅長的寫法就是散文,也就是把一個可能用兩個字就能叫出名字的東西,用二十個字去寫出來。我長這麼大,一共有兩次這種毛焦火辣的時候,第一次就是第一次寫英文文章的時候,空格,標點,大小寫,拼寫什麼的,上一次也花了大概3個月的時間度過了那個時期。這一次也差不多是3個月的時間。我的最大問題就是可以把每個點做好,但是沒有全局觀。

研究內容、研究方案

這個東西也是我寫標書的重災區,真的不亞於寫立論依據。最主要是我沒有一個很好的全局觀,也有就是很急,人在很急的情況下,腦袋往往就是Duang的。現在回想起來,其實就是回答你標書中每一個Aim,需要怎麼設計實驗,而且是多種方法體內外加人體最好。體內外都是一體的,前後要一致。研究方案就是把研究方法的東西細化。在寫這個部分時是被罵得最厲害的,我的導師分分鐘被我氣得發毛的邊緣,因為我有很多口水話,也就是說我可能說得出來,但是寫不好。所以要強加鍛鍊遣詞造句的能力,學會把複雜的東西簡單化,學會抓住重點。
後面的東西就比較套路,但是怎麼架構、怎麼鋪排還是很講究的。我這個人性格真的很粗獷,所以細緻的東西做的很差。這個是我以後需要強加改進的地方。
最後,在這次寫標書的過程當中,真的很敬佩我的導師。她每天都在看標書,從最開始不怎麼了解這個課題,到現在比我還了解的深入。她可以為了和我面對面改標書,一天往返北京。而且對於文字的雕琢、對於細節的東西特別的注重,她給我的感覺就是從她這裡出去的東西必定是精品,而且可以迎難而上,永不放棄。這次我真的是打心眼裡佩服她,敬重她。通過這一次,我也覺得我的人生目標可能需要制定的在高一點,應該更努力、更勤奮一些。天之道,損有餘而補不足。人之道,則不然,損不足以奉有餘。
又囉嗦了一大段,看到這裡的人,要謝謝你們聽我囉嗦。

下面進入今天的分享。

首先先將用流式細胞技術檢測細胞周期的圖片怎麼解讀。此圖為

image.png
橫坐標:為DNA的量,那兩個黑色的三角形代表的就是一個2N(G0/G1)的標記一個4N(G2/M)的標記,介於兩者之間的就是S期。
縱坐標:細胞計數,也就是有效的細胞計數。

右邊的那一組數據的解讀如下:
Dip G1:73.32% at 49.57,代表G1期DNA含量平均值為49.57,73.32%是G1期細胞數目佔總數目的73.32%,這個時候根據下方的All cycle events,就可以算出具體的數值。
Dip G2:9.58% at 99.15,代表G2期DNA含量平均值為99.15,9.58%是代表G2期細胞數目佔總數目的9.58%。
以此類推。。。。。。

其實做流式的時候,老師給你出的結果圖就如上圖。那我們用了這些數字除了解讀結果時用到外,還可以幹什麼呢?
我想說,你懂了以後,就可以隨意操作你的這些數字做不同的圖片出來,可以做Bar圖,可以做直方圖什麼的。如下圖的B圖就是根據A圖的數據做出的直方圖。

image.png

在細胞周期檢測中,流式老師可能還會給你幾個參數,如下:
CV:變異係數。這個指數在DNA檢測中很重要,因為不同物種之間細微的DNA差別都有很重要的意義。其解析度由G0/G1峰的CV來反映。而影響CV的因素主要包括樣品製備染色過程的人為影響和儀器。所以建議同一個實驗儘量由一個人在同一臺機器上完成。
Ploidy:倍體,指的是染色體數目,用來描述DNA總的含量。
在和control做比較時,如果你的第一個峰前面明顯出現另外一個高峰,如下圖一右側,那就是你的細胞凋亡增多(可以回看上期)。如果第一個峰明顯增高,如下圖二EGFP-NS1組比上MOCK,代表G0/G1期阻滯。
以此類推。。。。。。

一.png
二那我們會做了以後,可以用於什麼實驗設計中呢?

1. 做腫瘤相關研究的肯定用到此方法,不管做什麼幹預的。

2. 做藥物研究的,很多也會用到此方法,在你做藥物實驗沒有什麼focus的東西時,可以先嘗試做個細胞周期看看,說不定會給你一些新的線索與方法。

3. 做感染的時候,無論是細菌還是病毒,尤其是可以致癌的病毒,都可以做。在做p53相關、細胞衰老相關的都可以涉及。

4.涉及到細胞增殖實驗的,也可以用此方法。

最後,在針對不同細胞周期均有不同的激酶(如下圖)和周期蛋白,每個激酶有特定的抑制劑。

image.png
那知道這些激酶以後我們能幹什麼,在你檢測到你的處理組處於什麼細胞周期阻滯或增殖時,可以檢測相應的激酶或周期蛋白,查找引起這一現象相關的周期蛋白和激酶,然後再尋找下一步調控這些蛋白激酶的信號通路啊,非編碼RNA啊,蛋白啊什麼的。
好的,今天就分享到這裡,謝謝大家。

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