廣東惠州地區羅非魚鏈球菌病的分離、鑑定及藥敏分析

廣東惠州地區羅非魚鏈球菌病的分離、鑑定及藥敏分析

2015-05-28 15:54:00　　水產養殖網　　出處：《海洋與漁業》        瀏覽量： 4184 次 我要評論

　　作者：廣東省惠州市水產技術推廣站&nbsp陳冰玲&nbsp餘清華&nbsp董永宏
　　　　　廣東省惠州市海洋與漁業科學技術研究中心&nbsp李慶勇&nbsp張志敏/文圖

　　近年來，廣東省惠州地區羅非魚鏈球菌病發病率居高不下，病魚早期症狀不明顯，到中期治療難，嚴重影響了羅非魚養殖效益，給惠州水產養殖業造成了重大經濟損失。

　　2014年7月~10月，惠州市水產技術推廣站在全市範圍內開展了羅非魚鏈球菌病流行性調查，旨在找出惠州地區羅非魚鏈球菌病發病原因及安全有效的藥物，為生產中有效防治該病提供依據，促進惠州水產養殖業健康發展。

　　一、材料與方法

　　1．試驗材料
　　羅非魚病樣採自惠州地區羅非魚養殖密集區：惠城區小金口鎮、仲愷高新區潼湖鎮、潼僑鎮、博羅縣楊村鎮、惠陽區平潭鎮，共13個養殖場，合計採集羅非魚87尾，體重20g~700g。腦心浸液購自青島高科園海博生物技術有限公司，血平板購自廣東環凱微生物科技有限公司；藥敏片（抗生素類藥物）購自杭州天和微生物試劑有限公司。

　　2．病原菌分離與純化
　　病魚常規檢查記錄後，無菌條件下在病魚腦、後腎、肝、腹水等處取樣，劃線接種於血平板上，37℃培養16h後，挑取單菌落進行純化培養，觀察溶血性，用保鮮膜包裝後放入冰箱4℃保存備用。

　　3．病原菌鑑定
　　按常規方法對分離純化後的細菌進行革蘭氏染色，觀察染色特性及細菌形態。使用法國梅裡埃ATB細菌鑑定儀對分離到的菌株進行生化鑑定。

　　4．藥敏試驗
　　挑取單個菌落至裝有BHI液體培養液的搖菌管中，37℃，180rpm培養14h後，取100微升菌液至血平板上，塗布棒塗勻後貼上藥敏紙片，37℃培養24h後測量抑菌圈直徑。根據藥敏試紙抑菌環直徑判斷標準判斷藥物敏感度。

　　二、結果與分析
　　
　　1．羅非魚鏈球菌病主要症狀及病原菌分離結果
　　通過對惠州5個鄉鎮的採樣調查發現，大部分發病羅非魚眼濁，突起；胸鰭基部、腹部及肛門發紅；鰓絲髮黃粘連。剖檢可見，肝臟顏色變淡，軟化，膽囊腫大；腸道發炎；腹水多、脂肪多（見圖1、2、3）。從採樣的89尾魚中有73尾感染無乳鏈球菌，按症狀分，50尾有明顯臨床症狀或瀕臨死亡，23尾（魚苗較多）體表健康，無明顯病症；按分離出的細菌溶血程度分30%呈高度溶血、50%呈微溶血、20%不溶血；按菌種數量分，70%只感染鏈球菌1種菌，30%在感染鏈球菌的同時還感染了其他細菌，如嗜水氣單胞菌。

　　2．藥敏試驗結果
　　綜合73株病菌藥敏試驗結果分析可見，不同魚塘病菌對28種藥敏片的敏感程度不同，經統計，敏感比例：頭孢克洛＞氨芐西林＞米諾環素＞頭孢噻吩（先鋒Ⅰ）=慶大黴素=氧氟沙星；中度敏比例：氧氟沙星＞頭孢哌酮＞米諾環素＞乙醯螺旋黴素；耐藥比例：林可黴素＞苯唑西林＞四環素＞青黴素G，詳見表1。


　　三、討論

　　1．早期發病的魚無明顯症狀
　　通過本次調查發現，一些體表正常無明顯症狀的羅非魚（多為魚苗）也會感染鏈球菌病，細菌培養溶血性高。由於該病一旦出現明顯症狀治療起來比較困難，治癒率低，因此，提前預防、早發現、早治療對降低該病死亡率起著重要的作用。提醒魚苗放養前應徹底清塘，充分暴曬。

　　2．病原分離多種菌株
　　在本次試驗中，73尾魚感染病菌，其中70%的病魚只感染鏈球菌，30%的病魚在感染鏈球菌的同時還感染了嗜水氣單胞菌等細菌。雖然沒有對這些細菌進行回歸感染試驗，但在惠州多個鄉鎮同時發現此類情況，從而提醒在預防羅非魚鏈球菌病時，應同時注意控制其他病害的入侵。通過重點調節水質，提高飼料營養等方式，綜合預防羅非魚細菌性疾病的發生。

　　3．不同魚塘的魚對藥物敏感不同
　　試驗發現，不同魚塘分離到的病菌對藥物敏感程度不同。例如頭孢克洛，在本次被採樣的13個養殖場中，除仲愷高新區潼湖鎮某養殖場的羅非魚鏈球菌對該藥耐藥外，其它12個養殖場均呈現出中度敏感或高度敏感。藥物對病菌的敏感程度同時也受養殖環境、養殖方式和魚苗選擇影響。在用藥時，建議輪換使用不同藥物，避免長期應用某一種藥物而造成耐藥。

　　本次羅非魚鏈球菌病藥敏試驗主要針對抗生素類藥物。應用抗生素治療魚病雖容易造成耐藥，但由於目前疫苗尚未普及，中草藥抑菌的研究仍需進一步研究，就目前應用前景來說，本試驗結果可以為羅非魚鏈球菌病的預防和治療提供參考。

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