如何從血液中獲取單個核細胞呢?PBMC最常用的方法是利用密度梯度介質進行分離。
首先了解一下人外周血中不同種類細胞的密度和數量的分布,下圖可見單個核細胞的密度均小於1.077g/mL,所以目前分離PBMC用的Ficoll分離液密度為1.077g/mL,小夥伴們預測一下細胞分層後的效果,目的細胞應該在哪個位置呢?
趕快公布我們的答案,最下層應該是細胞數量最多且密度最大的紅細胞,最上層是密度較低的血漿,PBMC應該位於Ficoll分離液的上層,您猜對了麼?
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1、對血液樣品進行稀釋:血液等比稀釋(PBS等均可)。對血液稀釋的目的是降低粘性,提高細胞得率。
2、將稀釋後的血液樣品緩慢加到Ficoll分離液中,勿攪動。
3、室溫條件,水平轉子400g離心30-40分鐘,可見細胞分層。
1、血液樣品一定要新鮮,時間過久,死細胞較多。
2、Ficoll溶液密度會隨溫度變化,操作過程應在室溫18-22℃之間。
3、需要使用水平轉子,離心機升速降速要緩慢。
1、提供多種密度的Ficoll分離液,可分離外周血,骨髓和臍帶血中的單個核細胞,低密度的基質細胞,間充質幹細胞以及齧齒動物的血細胞等。
2、生產過程符合GMP以及美國藥典標準,無菌即用,內毒素含量低。
3、分離效果好,所得細胞活性>80%, Ficoll可高壓滅菌,有效期長達3年。
註:文中圖片和部分文字信息來自GE
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