Akt位點那麼多,看看磷酸化抗體領導者CST怎麼選
2020-11-30 網易新聞做磷酸化抗體試驗時難免會有這樣的困惑，對於常見的p-Akt（Thr308）和p-Akt（Ser473）位點，到底該選擇哪個？關於這個問題，作為磷酸化抗體領導者的CST及CST中國（賽信通）科研團隊可以助你一臂之力。
CST賽信通關於磷酸化抗體Autophagy Signaling信號通路圖
在分享來自CST及CST中國（賽信通）關於的答案之前，先來了解下Akt家族。Akt也被稱為蛋白激酶B(proteinkinaseB，PKB)，是一種分子量約為60kDa的絲/蘇氨酸蛋白激酶，存在於哺乳動物中的三種同工型。AKT可分為3種亞型(AKT1、AKT2、AKT3或PKBα,PKBβ,PKBγ)，3種亞型的功能各異，但也有重疊。AKT1廣泛地分布在組織中，Akt2主要分布在肌肉和脂肪細胞中，而Akt3則在睪丸和大腦中表達。Akt調控多個生物過程，包括細胞存活、增殖、生長和糖原代謝，Akt信號通路與惡性腫瘤、糖尿病、類風溼關節炎等多種疾病的發生發展密切相關，越來越受到廣泛的關注。
許多生長因子、激素與細胞因子通過結合其同源受體酪氨酸激酶(RTK)、細胞因子受體或GPCR，以及通過觸發脂質激酶PI3K的活化來激活Akt，從而在細胞質膜中生成PIP3。Akt通過其普列克底物蛋白同源(PH)結構域與PIP3相結合，導致Akt轉位至細胞膜。通過雙磷酸化機制，可以激活Akt。同樣因為自身PH結構域而轉位至細胞膜的PDK1，能夠活化Akt的Thr308位點使Akt磷酸化，PDK2再對Akt的Ser473位點磷酸化才能最後導致其完全活化，也就是說羧基末端Ser473位點的二次磷酸化對於活性來說也是必要的，並由mTOR-rictor複合體mTORC2完成，活化的Akt引起下遊磷酸化級聯反應和靶蛋白之間的相互作用。
CST賽信通關於磷酸化抗體MAP Kinase Signaling信號通路圖
那麼，CST及CST中國（賽信通）對於做磷酸化抗體時，磷酸化Akt位點的選擇有什麼樣的建議？細胞許多生物學功能中，PI3K/Akt信號通路發揮重要的調控作用，在細胞內起抑制凋亡，促進增殖的作用。作為PI3K的下遊蛋白，Akt主要有兩個重要的磷酸化位點Thr308和Ser473。PI3K不能直接活化Akt，它是通過與細胞內含有PH結構域的信號蛋白Akt和磷脂醯肌醇依賴激酶1（phosohoinositide-dependentkinase1，PDK1）結合，誘導Akt到細胞膜上，然後催化Akt蛋白的Thr308位點發生磷酸化，從而部分激活Akt，但是Akt功能活性的充分發揮還需要Ser473的磷酸化。在許多細胞系（尤其是腫瘤細胞系）中，對Akt功能的抑制多是通過抑制PI3K的功能（如使用PI3K特異性抑制劑LY294002和Wortmannin）而實現的，以p-Akt（Ser473）表達含量的降低為主要指標。PTEN蛋白是PI3K/Akt信號通路的主要負調節蛋白，拮抗PI3K和Akt，使PIP3脫磷酸，通過抑制Akt磷酸化並使其去磷酸化，使得細胞中的Akt磷酸化水平降低，從而阻斷PI3K/Akt信號通路，抑制細胞生長，促進細胞凋亡。
CST賽信通關於磷酸化抗體p53 Signaling信號通路圖
Thr308和Ser473兩個位點的激酶可能不同，PDK1磷酸化Akt308，而mTOR激活Akt473，一些研究表明Thr308的磷酸化會促進Ser473的磷酸化，因為AKT激活的磷酸化順序一般是先Thr磷酸化後Ser磷酸化，即Thr磷酸化後Akt一般都激活了。膜上的PDK1在AKt的Thr308位點將其磷酸化，導致Akt的部分激活。Ser473位點被mTORC2磷酸化，可激發Akt的完全的酶活性。在選擇位點的時候，可以從作用的激酶來推測哪一個位點可能會發生變化，最直接的位點是檢測Ser473，如果兩者都檢測的話那自然是比較好的。
CST及CST中國（賽信通）還有一個做磷酸化抗體的建議，即看看這兩個位點發生磷酸化修飾對生物學功能的影響。如果是做細胞凋亡、細胞周期、細胞骨架重組、癌症相關的話，Thr308和Ser473兩個位點都可能參與其中；如果研究細胞分化，可能需要多關注下Ser473位點；和蛋白降解相關的一般是Ser473位點；在非小細胞肺癌的研究中，可能與Thr308位點的磷酸化高度相關。但是必須要注意的是，信號通路錯綜複雜，最好還是結合文獻，來推測所需檢測的磷酸化308位點。
CST賽信通關於磷酸化抗體Phosphoinositide Signaling信號通路圖
據悉，CST（Cell Signaling Technology)是一家由科學家創立的私營家族公司，CST中國（賽信通）是CST在中國建立的獨資子公司，Jay Dong（董增軍）為副總裁兼亞太地區總經理。CST被公認為細胞信號研究的金標準、最佳抗體、研究者的首選、PTM（蛋白翻譯後修飾）的領導者、2018最高引用抗體品牌等。
CST賽信通關於磷酸化抗體Warburg Effect信號通路圖
CST提供最高品質的特色信號蛋白及磷酸化、甲基化、乙醯化、泛素化、SUMO化等翻譯後修飾抗體，蛋白翻譯後修飾篩選試劑盒及服務，還有偶聯抗體，二抗，ChIP試劑盒，細胞因子，ELISA試劑盒，細胞檢測試劑盒，蛋白實驗配套試劑等，提供蛋白相關實驗的一站式解決方案。
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磷酸化抗體使用建議,聽聽CST專家怎麼說
WB磷酸化蛋白曝不出條帶的時候，會特別沮喪，特別希望有人指點一二。在"CST抗體技術交流群"裡，大家隨時提問，同行或CST技術團隊會熱心解答。總結了下問題類型，不難發現，磷酸化抗體的使用，仍是許多人關心的重點，今天我們單獨把它拎出來說一說吧。 -
CST中國這個公司你可能了解不多,但它的磷酸化抗體卻早已聞名中外!
同時，總蛋白抗體也必不可少，僅僅是檢測到磷酸化蛋白表達量的增加並不能說明問題，只有磷酸化蛋白與總蛋白比值增加了才能說明磷酸化水平增加，這種表述實驗結果的方法是最客觀的，也是必需的。4.小心蛋白殺手組織或細胞裂解時會釋放出大量內源性蛋白磷酸酶，它可以催化磷酸化蛋白的去磷酸化，導致不同於正常生理狀態的差異。因此，在lysis buffer中加入蛋白酶抑制劑和蛋白磷酸酶抑制劑，抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，維護蛋白質的磷酸化狀態，非常重要。 -
磷酸化位點置信度分析
近期，利物浦大學的蛋白質研究中心和生物化學部，做了一系列工作，從質譜方法和分析軟體這兩個方面對磷酸化位點置信度的分析進行了討論。毫無疑問，提高磷酸化肽段的鑑定效率最有效的採用高分辨的串聯質譜。另外，磷酸化肽的可信度和位點的鑑定可以通過增加二級碎片離子的數量來提高，所以採用多種互補的碎裂模式可以實現這一點。 -
磷酸化真的如傳說中那麼難嗎?
好，今天第二期小課堂依舊是圍繞修飾展開——磷酸化的那些事兒~首先一起來認識一下它▼▼蛋白磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團（P04）轉移到不同種類的胺基酸上（主要包括絲氨酸該修飾是蛋白翻譯後修飾（PTM）中最為重要的形式，具有顯著的生物學功能，細胞增殖和凋亡，良性發育，信號轉導，新陳代謝，腫瘤發生等過程都有磷酸化蛋白的插足，如果小夥伴想玩點科研新花樣，又想增加課題深度（探究生物學病變機理），磷酸化修飾組學，是一個不錯的選擇！那麼問題來了，如何鑑定磷酸化蛋白呢？ -
Akt由磷酸化介導的活化
它的活化已知受兩個關鍵的磷酸化點控制——一個在催化域中，另一個在一個憎水主題內。在這項研究中，Wenyi Wei及同事發現，Akt的活性在整個細胞周期中波動，在靠近該分子的羧基端的兩個點上被Cdk2/cyclin A 或mTORC2磷酸化能促進其在截然不同生理條件下的完全活化。這些新穎的磷酸化事件在Akt的包括癌症、糖尿病和神經疾病在內的病理活動中似乎也是重要的。 -
MolecularCell（回顧）｜Lck的磷酸化位點調節CD45對Lck的激活
該Y192位點的突變會阻斷TCR信號，並損害胸腺細胞發育。機制上，Y192位點的突變抑制了CD45對Lck的C端抑制性磷酸化的去磷酸化激活作用，從而使Lck無法形成激活構象，激活下遊TCR信號。因此，該研究揭示了T細胞中激活性Lck含量及TCR敏感性的調控機制。 -
PNAS:新修飾新作用—AKT巰基化調控經典Tau磷酸化通路
AKT通過增加GSK3β的磷酸化使其失活。但是，令人不解的是AD患者的大腦含有高度磷酸化AKT，卻同時伴有GSK3β活性的增加，表明磷酸化AKT不能使GSK3β失活。然而，磷酸化的AKT不能磷酸化GSK3β的潛在機制仍然未知。 -
檢測磷酸化蛋白和總蛋白的機理和實驗技巧總結,研究人員轉發
免疫細胞研究 微信號：antibody-king新朋友點圖片上方藍字 免疫細胞研究bioworld 關注，記錄你探索生命科學的軌跡，分享科研旅途中的點點滴滴，抗體，質粒QQ號諮詢：4006609091>--- 檢測磷酸化蛋白的抗體是針對該蛋白的特異性磷酸化位點的，而檢測總蛋白的抗體一般針對的是該蛋白別的位點，故而磷酸化抗體檢測不到總蛋白，而總蛋白抗體能檢測包括磷酸化和未磷酸化蛋白在內的目的蛋白。 -
Akt由磷酸化介導的活化 - Nature報導專區 - 生物谷
它的活化已知受兩個關鍵的磷酸化點控制——一個在催化域中，另一個在一個憎水主題內。在這項研究中，Wenyi Wei及同事發現，Akt的活性在整個細胞周期中波動，在靠近該分子的羧基端的兩個點上被Cdk2/cyclin A 或mTORC2磷酸化能促進其在截然不同生理條件下的完全活化。這些新穎的磷酸化事件在Akt的包括癌症、糖尿病和神經疾病在內的病理活動中似乎也是重要的。 -
耶魯大學劉延盛團隊發現磷酸化修飾對蛋白質表達穩定性的影響
最常見的磷酸化修飾對於蛋白質的特性和功能發揮著基礎作用。高分辨質譜技術的發展已經使得宏觀層面的整體蛋白修飾研究成為現實，然而，在蛋白質組範圍內磷酸化修飾位點對蛋白更新和表達穩定性的影響尚不完全清楚。建立基於數據非依賴型採集（Data-independent acquisition mass spectrometry, DIA-MS）和穩定同位素脈衝式標記技術，對不同修飾形式的蛋白質更新與降解（turnover）速率[1]和表達穩定性進行了大規模定量，並開發出一種基於肽段匹配的獨特的分析策略，從而在整個蛋白組層次定量評估了磷酸化修飾位點對蛋白質更新周期（lifetime）的影響。 -
抗體-二抗的選擇難道真的只有那麼簡單?
例如，如果一抗是在小鼠體內製備的，那麼你就應當選擇抗小鼠的二抗，如果一抗是在兔體內製備的，那麼二抗就應當是抗兔的抗體。至於二抗本身是在什麼動物中製備的對二抗的質量並無明顯的影響。一抗是屬於哪個類或亞類二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應的二抗就是抗IgG抗體。 -
高通量蛋白質組和磷酸化組分析揭示化療藥物耐藥性和糖酵解過程的...
最近，德國慕尼黑理工大學的研究者在國際著名期刊Cancer Research發表論文，綜合分析了拉帕替尼敏感和耐藥細胞系中的蛋白質組和磷酸化組，發現AKT信號通路和糖酵解過程在耐藥細胞系中發生顯著改變，並可以作為針對性的治療靶標。景傑生物作為全球蛋白質及蛋白質修飾領域的領跑者，可以為您提供從組學篩選到抗體定製的全套解決方案，為您的科研助一臂之力。 -
定量磷酸化蛋白質組學 nature新發,擬南芥植物氣孔免疫調節機制
先前報導OSCA1.3磷酸化位點位於第一個細胞質環中。體外pull down實驗表明OSCA1.3-loop1與GST-BIK1直接相互作用，並可以被磷酸化（圖2a，b），且這種磷酸化依賴於BIK1激酶的活性（圖2b）。在OSCA1.3-loop1中對已識別的磷酸化位點（S49和S54）和鄰近的S50進行定向突變，然後進行體外放射性激酶測定，結果表明BIK1主要使S54位點磷酸化（圖2b）。 -
磷酸化調控蛋白質結合機制研究取得進展
近日，中國科學院精密測量科學與技術創新研究院理論與計算化學組副研究員段謨傑等利用計算模擬方法及增強採樣技術，揭示磷酸化修飾對固有無序KID結構及其與KIX蛋白結合過程的調控機制。磷酸化修飾是生物體內常見的一種翻譯後修飾，在調控信號轉導及細胞生長和凋亡等過程中發揮重要作用。較多磷酸化位點位於固有無序蛋白或無序蛋白區域上。這些蛋白的高度動態及伸展特性使其較易被化學修飾。 -
O-GlcN醯化和磷酸化之間的交叉點:對多個信號通路的影響.
O-GlcN醯化類似於磷酸化：它發生在蛋白質的絲氨酸和/或蘇氨酸側鏈上，在細胞激活後迅速循環。O-GlcNAc和磷酸表現出複雜的相互作用：它們可以競爭性地佔據單個位點或近端位點，也可以非競爭性地佔據底物上的不同位點。磷酸化調控O-GlcNAc循環酶，反之，O-GlcN醯化控制磷酸循環酶。這種串擾在細胞的所有隔間都很明顯，這一發現與O-GlcNAc在調節營養和壓力誘導的信號轉導中的基本作用是一致的。 -
當磷酸二酯酶(PDEs)遇上FabGennix~
近年來，PDEs成為了新的治療靶點，受到越來越多的學者關注，成為了一個新的研究熱點。藉此研究熱潮，小達君為各位呈上「美味佳餚」--FabGennix的PDEs相關產品，助力您的科學研究。PDEs是水解細胞內的環磷酸腺苷(cAMP) 和環磷酸鳥苷(cGMP) 的酶類。 -
那麼多的隨心飛，到底怎麼選？
最近很多讀者留言我，說是希望嬉遊君能寫寫那麼多航司的隨心飛。我的統一回復都是「讓子彈先飛一會兒」。的確，目前多家航司都有陸續推出隨心飛的產品，而且接下來還會有更多的航司跟進。我不推薦大家盲目購買，一定要按需，從那麼多家航司的隨心飛套餐中選擇出真正適合自己的產品來。 -
劉濤研究團隊在JACS上發文報導蛋白磷酸化研究的新技術
酪氨酸磷酸化修飾是常見的蛋白翻譯後修飾方式之一，在細胞信號轉導中起著重要作用，當該修飾發生異常時，則會導致相關疾病的產生。酪氨酸磷酸化修飾具有可逆性，由蛋白酪氨酸激酶(Protein Tyrosine Kinases，簡稱PTKs)負責添加磷酸基團，由蛋白酪氨酸磷酸酶(Protein Tyrosine Phosphatases，簡稱PTPs)催化去掉磷酸基團。 -
PI3K-AKT通路專題解析(上)
PI3K可以將代謝物PIP2磷酸化為PIP3(加一個3位磷酸基團)。而脂質磷酸酶（例如PTEN），則可以代謝（去磷酸化）PIP3，使之變回PIP2，從而終止PI3K信號通路（備註：圖5右圖PTEN的標註有歧義，PTEN的作用是促進去磷酸化PIP3從而抑制其在細胞內累積）。在這個過程裡，如果PI3K比喻成信號傳遞的油門的話，PTEN就是剎車。 -
科學網—「人工葉綠體」讓光合磷酸化更高效
隨著對光合作用過程理解的不斷加深，越來越多的科研工作者開始模仿光合作用中的一系列過程，實現能量轉化，使得能量得以儲存、利用。 光合磷酸化，從光能到化學能 人類對於光合作用的認識在過去的兩百年中不斷加深。1779 年，荷蘭科學家 Jan Ingen housz發現光是起到使空氣變好的必要條件，打開了人類認識光合作用的大門。