初學者如何做好蛋白表達?這 8 個知識點收好

2020-12-05 騰訊網

重組蛋白表達技術可以用來分析基因調控以及研究蛋白質結構和功能。無論是體內功能研究還是用於結構研究的大規模生產，以及生物治療領域的藥物開發都需要用到蛋白表達技術。

OK，有關蛋白表達的重要性，這裡就不再贅述了。下面是義翹神州整理總結的蛋白表達的純乾貨，不敢說嘔心瀝血吧，但絕對算是蛋白表達的良心製作。再說一遍，以下內容全是乾貨，內容量大，還有進階版的案例分析，喜歡的可以先收藏。

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1 蛋白質通用合成路徑

DNA —>mRNA—> 蛋白

實際操作流程為

1. 克隆或合成目的基因

2.載體構建

3.蛋白表達與純化

4.蛋白的大量表達與純化（或無）

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2 克隆或合成目的基因

典型的表達載體包括至少 4 個主要元件：

? 目的基因表達框（包括啟動子和基因終止或 poly (A) 信號）

? 細菌的複製起始點（ori）

? 特定宿主的抗生素選擇框（如潮黴素 B、黴酚酸、嘌呤黴素、殺稻瘟菌素 S 等）

? 大腸桿菌的抗生素選擇框（如氨苄青黴素、殺稻瘟菌素 S、羧苄青黴素、Zeocin 選擇性抗生素抗性等）

其他元件還包括：

? 多克隆位點（MCS）（即多酶切接頭）

? 表位標籤

? 分泌信號

? 蛋白酶識別位點

? 內部核糖體插入位點（IRES）

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3 不同蛋白表達系統選擇

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4 重組蛋白表達實驗方案及經典案例解析

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5 幾種常見的蛋白表達案例

蛋白表達是許多小夥伴的實驗課題中的主要內容。由於涉及不同的研究領域，表達載體多種多樣，每個人要表達的蛋白特性更是千差萬別，特別是一些小夥伴是第一次做課題，關於怎樣表達蛋白，怎樣安排實驗步驟更是一頭霧水。這裡按照不同表達載體，列舉最常用的重組蛋白表達方案。對每一種蛋白表達案例從實驗步驟、大只需用時間以及每個步驟需要完成的目標進行比較，大家可以對照自己的實驗內容，希望能有所幫助。

常用的蛋白表達（含細胞株的製備）：

? CHO 穩定細胞株開發

? HEK293 穩定細胞株開發

? 原核蛋白表達

? 哺乳動物細胞瞬時表達

? 酵母蛋白表達

? 杆狀病毒與昆蟲細胞蛋白表達

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6 重組蛋白技術方案

1. CHO 穩定細胞株開發

2. HEK293 穩定細胞株開發

3. 原核蛋白表達流程

4. 哺乳動物細胞瞬時表達流程

5. 酵母蛋白表達流程

6. 杆狀病毒 - 昆蟲細胞蛋白表達流程

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7 不同蛋白表達之比較

以上實驗方案的完成時間是較為成熟的實驗室的工作流程用時，小夥伴可以根據自己的實驗安排靈活掌握。完成目標也應該根據自己的課題要求進行適當增減。如果大家有比較大型的研究課題，蛋白表達只是整個課題的一部分的話，義翹神州可以提供以上各種蛋白表達服務。

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8 義翹神州技術優勢

★ 高效表達載體

★ 高密度細胞培養

★ 自主產權的培養基配方

★ >6,000 蛋白表達、純化生產經驗

★ 包涵體蛋白復性技術和可溶性表達

★ 蛋白生物藥產業化技術

儀器設備展示

聯繫方式

題圖來源：站酷海洛

文章來源：義翹神州

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