基因組DNA提取常見問題及注意事項

2020-12-01 中國教育裝備採購網


  1.待提取樣本儘量避免反覆凍融,否則會導致提取的DNA片段降解或者DNA得率嚴重下降;

  2.試劑盒中BufferEB中含有少量EDTA,可能影響下遊實驗,使用時適當稀釋,如果用其他洗脫液洗脫,要確保PH>7.5,PH過低影響洗脫效率;

  3.離心柱漂洗完成後,儘可能烘乾柱膜上殘留乙醇,殘留乙醇會影響洗脫效率和下遊實驗效果;如果A260/230值過低,說明樣本提取過程中,漂洗不徹底,有鹽離子殘留,建議增加漂洗次數;

  4.對於基因組DNA提取,A260/280值如果低於1.7說明有可能存在蛋白汙染,如果值大於1.9,說明可能存在RNA汙染;如果洗脫樣本時沒有使用BufferEB,而使用ddH20,比值或偏低,因為Ph值會影響吸光值,並不表示樣本純度低;

  5.對於植物樣本,樣本處理量無法統一確定,對於一般樣本(菸草,擬南芥等),提取量不超過100mg鮮重組織或者20mg乾重組織,對於複雜樣本(水稻,玉米,榆樹等),建議初始樣本量不超過50mg鮮重或者10mg乾重組織;如果需要較高的DNA量,可以採取多管濃縮的方法提取DNA;

  6.對於植物樣本,如果短時間不能低溫處理,建議使用矽膠顆粒乾燥樣本,防止DNA嚴重降解;研磨處理材料過程中儘量不要過量,否則會導致DNA產量低;材料過量也會使樣本出現團塊無法裂解,導致離心柱堵塞,無法獲得高質量DNA;

  7.植物組織在降低初始樣品量後,仍舊無法改變裂解液體粘稠,離心柱堵塞,DNA得率低,建議使用本公司BufferPL對樣本預處理1-3次後在進行提取;

  8.對於血液樣本,最好使用新鮮血液樣本或者4℃存放少於2天的樣本,否則會嚴重降低DNA產量;儘量避免反覆凍融(不超過3-5次),每一次凍融都會降低DNA得率;

  9.對於血液樣本,如果樣本中含有血塊,說明樣本收集時未加入血液抗凝劑;建議重新收集樣本並加入EDTA,肝素,檸檬酸等抗凝劑;

  10.在使用紅細胞裂解液處理血液時,確保血液樣本已經恢復到室溫狀態;處理過程中儘可能混勻樣本,防止紅細胞裂解不完全;

  11.對於細菌樣本DNA提取,試劑盒中的溶菌酶可以裂解大部分革蘭式陽性細菌,對於特殊細菌如葡萄球菌,需要提高溶菌酶用量(建議10mg/ml溶菌酶使用量增加一倍)和溶葡萄球菌酶(Lysostaphin)共同使用;

  12.DNA濃度及純度判斷:[DNA]μg/ml=A260x稀釋倍數x50.0(50.0:DNA的平均吸收係數);

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