核酸雜交又叫分子雜交,是鑑定和篩選重組體的一種方法

2021-01-08 情感鋪

PCR應用十分廣泛,並且可通過菌液PcR進行重組克隆的快速篩選。基本方法是從抗性平板上挑取單菌落接種至250μL的LB培養基中，200r/min振蕩培養8h以後，取1μL菌液進行裂解製備模板進行PCR篩選。

(三)核酸雜交篩選法

核酸雜交又叫分子雜交(molecular hybridization)， 是鑑定和篩選重組體的一種方法。原理是:兩條具有鹼基互補序列的DNA分子變性後，在溶液中-起進行復性時，可以形成雜種雙鏈DNA分子。同樣，- 條DNA鏈與之具有互補鹼基序列的RNA鏈在一起復性時， 也能形成雙鏈結構(DNA- RNA雜交體)。雜交包括下列過程:①DNA的「熔解」,即變性，目的是使雙螺旋解開成為單鏈，這可將DNA溶液的溫度升高超過Tm值(解鏈溫度)即可:②退火，即DNA的復性，將加熱過的DNA溶液緩慢冷卻即可發生。

雜交的雙方是待測的核苷酸序列及探針。待測核酸序列可以是克隆的基因片段，也可以是未經克隆的基因組DNA或是細胞總RNA。核酸雜交方法的兩個特點是高度特異性及高度靈敏性。

1.菌落雜交

在大量篩選重組的細菌細胞時，需要從中尋找出為數極少的含有目的序列的細胞。另外.在利用插入失活、顯色反應等手段得到含重組質粒的細菌細胞後，還需要證明這些重組質粒是否含所需要的目的序列。若將所得菌落逐個擴大培養，提取質粒DNA,然後用Southern雜交法固然可以鑑定重組質粒。

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    2.工具（1）基因的「剪刀」—限制性核酸內切酶（限制酶）①識別位點：一種限制酶只能夠識別一種特定的核苷酸序列②作用位點：磷酸二酯鍵③作用結果：黏性末端或平末端（2）基因的「針線」—DNA連接酶①作用：連接黏性末端或平末端脫氧核糖和磷酸之間的缺口（3）基因的運載體—質粒（最常用）
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    近日，中國科學院院士朱作言就轉基因問題，接受澎湃新聞（www.thepaper.cn）專訪時表示，準確地說，人們常說的轉基因，是一種分子雜交，或分子雜交育種。 他進一步解釋說，傳統的雜交育種是兩個物種、品種進行雜交，引入成千上萬個基因。而轉基因，或叫分子雜交育種技術，唯一的不同是用一個基因去和另一物種或品種雜交，引入的是唯一一條基因，更精準高效。
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  • 關於酵母雙雜交系統,你一定需要知道這些!!
    酵母雙雜交酵母雙雜交由Fields在1989年提出，主要用於在酵母體內分析蛋白質-蛋白質相互作用的基因系統，也是轉錄因子模塊結構的一種遺傳學方法。酵母雙雜交系統是在真核模式生物酵母下進行的，研究活細胞內的蛋白質相互作用，對蛋白質之間微弱的、瞬間的作用也能通過報告基因的表達產物敏感的觀察到。
  • 原位雜交簡介
    原位雜交簡介 來源：來源網絡 2006-12-09 21:05 原位雜交是在分子生物學領域應用極為廣泛的實驗技術之一，是在研究生物體發育過程中的一種極為重要的分子遺傳學的研究方法
  • 人工雜交技術和轉基因技術概念不同
    研究還表明，陸地上約有86%，海洋中約有91%的物種還沒有被人們發現和分類。　　人工雜交技術可分為植物雜交和畜牧雜交，植物雜交是指近緣種間的有性繁殖，植物嫁接不屬於此列。畜牧雜交是指兩個不同近交系之間，優質品種的雌雄畜牧進行有計劃的交配，雜交所產生的第一代動物，具有兩親本遺傳的優質特性，用於改良家畜品質，有著正常的生長周期和正常繁殖能力的畜牧品種。
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