化學發光底物魯米諾應用於蛋白印跡WB

2021-01-13 德晟生化試劑原料

魯米諾luminol，也叫發光氨，可以檢測處極少量的過氧化氫，通常作為過氧化物酶的底物用於各類生化檢測，靈敏度非常高且易於自動化，其中蛋白質印跡WB實驗就經常使用魯米諾製成的ECL發光液。

在蛋白質印跡法（Western Blot）即蛋白質免疫印跡試驗，使用的ECL發光液就是由魯米諾製作而成的。魯米諾發光免疫分析通常是Western Blot的最後一步，加入1：1的溶液A和溶液B，覆蓋pvdf膜，可以通過發光來觀察實驗結果。這裡的發光液A和B分別就是由魯米諾和過氧化氫製成的溶液。

ECL發光液原料魯米諾luminol

蛋白免疫印跡是將細胞或組織總蛋白質進行電泳分離後從電泳凝膠轉移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然後用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質檢測技術，現已廣泛應用於基因在蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面。目標蛋白HRP酶標記後，就可以通過魯米諾發光進行觀察檢測。

蛋白質印跡Western Blot與DNA印跡雜交Southern Blot或RNA印跡雜交Northern Blot雜交方法類似，但WB法採用的是聚丙烯醯胺凝膠電泳，被檢測物或印跡的對象是蛋白質。蛋白或多肽樣品經過PAGE分離後轉移到載體硝酸纖維素薄膜上，固相載體以非共價鍵吸附蛋白質且保證活性，蛋白質作為抗原與抗體反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用於檢測蛋白水平的表達。

當然WB實驗除了用魯米諾ECL發光液檢測以為，還可以用其他顯色方法，比如底物DAB顯色或者新型Trinder’s試劑酶聯免疫分析，德晟又多種過氧化物酶的發光底物魯米諾及顯色底物TOOS、MAOS等。

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