蛋白質免疫印跡（Western Blot，簡稱 WB）可以：
1. 從蛋白質混合物中檢出目標蛋白質；
2. 定量或定性確定細胞或組織中蛋白質的表達情況；
3. 用於蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA 相互作用後續分析。
WB 是將蛋白質轉移到膜上，然後利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。
與 Southern 或 Northern 雜交方法類似，但 WB 採用的是聚丙烯醯胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，「探針」是抗體，「顯色」用標記的二抗。
經過 PAGE 分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用於檢測蛋白水平的表達。
一、試劑準備
1. SDS-PAGE 試劑：見聚丙烯醯胺凝膠電泳實驗。
2. 勻漿緩衝液：1.0 M Tris-HCl(pH 6.8) 1.0 ml；10%SDS 6.0 ml；β- 巰基乙醇 0.2 ml；ddH2O 2.8 ml。
3. 轉膜緩衝液：甘氨酸 2.9 g；Tris 5.8 g；SDS 0.37 g；甲醇 200 ml；加 ddH2O 定容至 1000 ml。
4. 0.01 M PBS(pH7.4)：NaCl 8.0 g；KCl 0.2 g；Na2HPO4 1.44 g；KH2PO4 0.24 g；加 ddH2O 至 1000 ml。
5. 膜染色液：考馬斯亮蘭 0.2 g；甲醇 80 ml；乙酸 2 ml；ddH2O118 ml。包被液（5% 脫脂奶粉，現配）：脫脂奶粉 1.0 g 溶於 20 ml 的 0.01 M PBS 中。
6. 顯色液：DAB 6.0 mg；0.01 M PBS 10.0 ml；硫酸鎳胺 0.1 ml；H202 1.0 μl。
二、蛋白樣品製備
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1. 單層貼壁細胞總蛋白的提取
① 倒掉培養液，並將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸乾培養液（或將瓶直立放置一會兒使殘餘培養液流到瓶底然後再用移液器將其吸走）。
② 每瓶細胞加 3 ml 4℃預冷的 PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放輕輕搖動 1 min 洗滌細胞，然後棄去洗液。重複以上操作兩次，共洗細胞三次以洗去培養液。將 PBS 棄淨後把培養瓶置於冰上。
2. 組織中總蛋白的提取
① 將少量組織塊置於 1～2 ml 勻漿器中球狀部位，用乾淨的剪刀將組織塊儘量剪碎。
② 加 400 μL 單去汙劑裂解液裂（含 PMSF）於勻漿器中，進行勻漿。然後置於冰上。
三、 蛋白含量的測定
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1. 製作標準曲線
① 從－20℃ 取出 1 mg/ml BSA，室溫融化後，備用。
② 取 18 個 1.5 ml 離心管，3 個一組，分別標記為 0 mg，2.5 mg，5.0 mg，10.0 mg，20.0 mg，40.0 mg。
2. 檢測樣品蛋白含量
四、SDS－PAGE 電泳
1. 清洗玻璃板
一隻手扣緊玻璃板，另一隻手蘸點洗衣粉輕輕擦洗。兩面都擦洗過後用自來水衝，再用蒸餾水衝洗乾淨後立在筐裡晾乾。
2. 灌膠與上樣
① 玻璃板對齊後放入夾中卡緊。然後垂直卡在架子上準備灌膠。（操作時要使兩玻璃對齊，以免漏膠。）
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