技巧篇 | 蛋白質印跡常見問題及解決辦法

2020-10-12 雲克隆

蛋白質印跡（Western Blot）是根據抗原抗體特異性結合的原理檢測複雜樣本 中的某種蛋白的方法。將混合抗原樣本在凝膠板上進行單向或雙向電泳，經過 PAGE 分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白 質，且能保持電泳分離的類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽 作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與或標記的第二抗體起反應，經過底物顯 色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術廣泛應 用於鑑定蛋白以及對蛋白進行定性和半定量分析。

蛋白質印跡分為蛋白質分離、蛋白質印跡和蛋白質鑑定三個步驟。每個步驟和 環節都可能影響到最終結果, 要想獲得理想的實驗結果，每個步驟都不能馬虎。現 就實驗中遇到的常見問題進行分析總結，給出解決方案，以提高蛋白質印跡實驗的 成功率。

1.蛋白質分離-電泳中的問題

蛋白質印跡實驗是建立在聚丙烯醯胺凝膠電泳 SDS-PAGE 基礎上的，所以蛋 白質印跡有些問題是由前期電泳引起的。因此，在此簡單介紹電泳中出現的問題。

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