蛋白質印跡免疫分析(Western Blot Anglysis)

2020-12-03 中國教育裝備採購網

　　【基本原理】

　　蛋白質印跡免疫分析的過程包括蛋白質經凝膠電泳分離後，在電場作用下將凝膠上的蛋白質條帶轉移到硝酸纖維素膜上，經封閉後再用抗待檢蛋白質的抗體作為探針與之結合，經洗滌後，再將濾膜與二級試劑—放射性標記的或辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酶偶聯抗免疫球蛋白抗體結合，進一步洗滌後，通過放射自顯影或原位酶反應來確定抗原—抗體—抗抗體複合物在濾膜上的位置和豐度。

　　【器材】

　　1.轉移電泳儀

　　2.硝酸纖維素膜

　　3.濾紙

　　4.剪刀

　　5.手套

　　6.小尺

　　【試劑】

　　1.Ig G 標準品。

　　2.羊抗人辣根過氧化物酶(HRP)標記的IgG 抗體。

　　3.轉移buffer：Tris 3.03g，Gly 14.4g，甲醇200ml，加三蒸水至1000ml 充分溶解，4℃冰箱貯存。

　　4.Tris buffer(TBS)：Tris 2.42g，NaCl 29.2g，溶於600ml 三蒸水，再用1N HCl調至pH7.5，然後補加三蒸水至1000ml。

　　5.漂洗液(TTBS)：TBS液500ml，加Tween20 250ul。

　　6.封閉液：5%脫脂奶粉。

　　7.抗體buffer：1.5g BSA溶於50ml TTBS。

　　8.顯色液DAB(3.3-diaminobenzidine，3.3-二氨基聯苯胺)配製：5mg DAB溶於

　　10ml 檸檬酸buffer(0.01mol/L 檸檬酸2.6ml，0.02 mol/L Na2HPO4 17.39ml)，加30% H2O2

　　10μl(臨用時現配)。

　　9.脫色液：甲醇250ml，冰醋酸100ml，加蒸餾水至1000ml。

　　10.氨基黑染色液(0.1%氨基黑-10B)：0.2g氨基黑-10B 溶於200ml 脫色液中，充分攪拌溶解，濾紙過濾。

　　上海創賽科技性能卓越，白介素細胞因子，胎牛血清，電泳設備科學儀器，原料藥標準品，化學試劑，細胞培養耗材，上海創賽，海量產品特價促銷中，歡迎來電諮詢!

版權與免責聲明：

① 凡本網註明"來源：中國教育裝備採購網"的所有作品，版權均屬於中國教育裝備採購網，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用。已獲本網授權的作品，應在授權範圍內使用，並註明"來源：中國教育裝備採購網"。違者本網將追究相關法律責任。

② 本網凡註明"來源：XXX（非本網）"的作品，均轉載自其它媒體，轉載目的在於傳遞更多信息，並不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，且不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。如其他媒體、網站或個人從本網下載使用，必須保留本網註明的"稿件來源"，並自負版權等法律責任。

③ 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起兩周內與本網聯繫，否則視為放棄相關權利。

相關焦點

  • Western Blot(WB)蛋白免疫印跡基本原理及FAQ | RIP專題
    免疫印跡（Western Blot） 採用的是聚丙烯醯胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，「探針」是抗體，「顯色」用標記的二抗。SDS-PAGE 可對蛋白質樣品進行分離，轉移到固相載體——例如硝酸纖維素薄膜（NC）上。固相載體可以吸附蛋白質，並保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。
  • 實驗專區 | 視頻+文字詳解蛋白質免疫印跡(Western Blot )的主要步驟
    視頻中，主要介紹了蛋白質免疫印跡的主要步驟，即樣品製備，SDS-PAGE，膜阻斷/用抗體探測和檢測。（視頻+文字一起「食用」更佳哦~）蛋白質免疫印跡是一種分析技術，用於檢測給定的組織勻漿或提取物樣品中的特定蛋白質。它使用凝膠電泳通過多肽的長度（變性條件）或通過蛋白質的3-D結構（天然/非變性條件）分離天然或變性蛋白質。
  • western blot 過程詳解
    1原理及目的：Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然後利用抗體進行檢測。Westernblot 試劑盒顯色。15. 分析比較記錄。一、  Western具體實驗步驟1.收集蛋白樣品（Protein sample preparation）可以使用適當的裂解液裂解貼壁細胞、懸浮細胞或組織樣品。
  • Western blot實驗室實操+原理
    WB流程圖western blot即免疫印跡試驗是一個非常非常重要的實驗技能
  • 初學者的western blot操作步驟大全
    Western Blot 第1階段：樣品製備Novus Biologicals Visual Protocols: In phase 1 of the western blot procedure, you will learn how to prepare
  • Westernblot實驗步驟及注意事項
    進行Bradford比色法測定蛋白質濃度 8. 取相同質量的細胞裂解液（體積*蛋白質濃度），並加等體積的2×電泳加樣緩衝液 9. 沸水浴中3分鐘 10. 上樣 11. 電泳（濃縮膠20mA，分離膠35mA） 12. 電轉膜儀轉膜（100mA 40分鐘） 13.
  • Western blot 實驗步驟
    Westernblot 的實驗基本原理：本實驗是對蛋白進行定性和半定量分析
  • western blot 實驗從技術角度,教你如何辨別成像儀
    我們都知道，目前western blot 實驗是研究蛋白質中最常見、最經典的一種實驗技術，可與眾多實驗技術搭配，為蛋白質研究保駕護航。但其耗時長、步驟多、變量雜，而我們在結果成像中，最關心的點有哪些呢？這些我們最關心的點，又體現在成像儀的哪些方面呢？
  • 淺談Western blot
    Western blot（蛋白印跡）是科研研究中最為平常的實驗，但卻蘊含了很多知識。儘管我們在接觸該實驗時都會被虐的體無完膚，但卻秉承著「WB虐我千百遍，我卻待它如初戀」的精神一直和WB鬥智鬥勇。現在就把各位前輩做WB的各種經驗總結起來，希望對大家能有所幫助。
  • ...基於四唑修飾光敏性水凝膠的靈敏、快速響應的單細胞免疫印跡技術
    單細胞免疫印跡技術（scWestern），採用可擴展開放式的微孔陣列凝膠晶片，通過重力作用驅動細胞沉降落孔，經化學裂解細胞並整合SDS-PAGE電泳分離細胞裂解釋放的蛋白質，後以短時間紫外線激發（～60s）激活光敏性凝膠，凝膠與蛋白質交聯而固定蛋白質固定於凝膠內。
  • Western Blot (免疫印記法)常識問答
    什麼是western blot?　　答：WB又稱免疫印記法.是將生物大分子物質通過不同途徑轉移到固相載體的過程。　　2. western blot 有什麼優點?　　答：靈敏，可達ng級，用Ecl顯色法理論上可達pg 級。方便，特異性高。　　3. western blot 的具體步驟是什麼?　　答：一.
  • Western-blot整個實驗過程中的原理全在這裡
    Western blot可謂是我們基礎研究中必備的技能之一，或許你對於其中的步驟瞭然於胸，但這些原理，你知道嗎？？？蛋白質印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。
  • 獻給初學者:western blot 操作步驟詳解
    ，編輯了這份 western blot 操作步驟，內容包括主要操作步驟和所需要注意的有用的細節，並附上參考文獻。蛋白質印跡的發明者是史丹福大學 George Stark。Neal Burnette 於 1981 年所著的 Analytical Biochemistry 中首次被稱為 Western Blot。
  • 獻給初學者:western blot 操作步驟詳解(上)
    ，說法各異，於是綜合了目前網上所能找到的資料和個人實際經驗，編輯了這份 western blot 操作步驟，內容包括主要操作步驟和所需要注意的有用的細節，並附上參考文獻。我按下文的步驟操作已經做出來了穩定可重複的、背景乾淨的 western 條帶了，所以相信你也行。為了節省時間，我總結了一下 western blot Quick Guide和一天做出 western 的具體時間規劃，附在文末，要在下一次展示。
  • Western免疫印跡
    Western免疫印跡 來源：來源網絡 2007-08-09 20:13 Western
  • Western Blot詳解-原理
    Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然後利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot採用的是聚丙烯醯胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，「探針」是抗體，「顯色」用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。
  • Western Blot詳解-常見的問題指南(一)
    C.細胞水平要做western blot，多少細胞提的蛋白夠做western blot？  解答：一般5×10^6就足夠了D.同一樣品能同時提RNA又提蛋白麼？這樣對western blot有無影響？  解答：能，沒有問題，我們做過。
  • 技術:Western Blot
    蛋白質免疫印跡試驗即Western Blot，是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。蛋白質免疫印跡法是由瑞士米歇爾弗雷德裡希生物研究所（Friedrich Miescher Institute）的Harry Towbin在1979年提出的。
  • Western Blot定量——面積法
    > 歡迎大家關注微信公眾號背景介紹  蛋白質印跡法
  • 獻給初學者:western blot 操作步驟詳解(下)
    目的是為了活化 PVDF 膜上面的正電基團，使它更容易跟帶負電的蛋白質結合，做小分子的蛋白轉移時多加甲醇也是這個目的。將玻璃板撬開才可剝膠，撬的時候動作要輕，要在兩個邊上輕輕的反覆撬。撬一會兒玻璃板便開始鬆動，直到撬去玻板（撬時一定要小心，玻板很脆弱，我用的是冰箱裡附帶的塑料除霜鏟，效果出奇的好）。除去小玻璃板後，將濃縮膠輕輕刮去，要避免把分離膠刮破。