只需30分鐘,鯉科皰疹病毒病原檢測新方法問世

2020-12-04 中國水產養殖網

鯉科皰疹病毒III型(Cyprinidherpesvirus3,&nbspCyHV-3)是皰疹病毒科中具有強致性和強傳染性的成員，對該病毒的檢測方法主要是酶聯免疫吸附測定法(ELISA)、免疫組化法、聚合酶鏈式反應法(PCR法)和環介導恆溫擴增法(LAMP)，這些方法由於在操作簡便性、檢測靈敏度、檢測準確性和現場可操作性等方面存在的問題而使用受限。

近期，美國俄勒岡州立大學的科學家公布了一種檢測鯉科皰疹病毒III型的方法—重組酶聚合酶擴增法(recombinasepolymerase&nbspamplification,&nbspRPA)，並結合核酸試紙檢測，大大降低了操作的複雜性，提高了檢測的靈敏度和準確性。該方法只需對樣品進行簡單的預處理，在37℃條件下完成病毒DNA的擴增，並使用核酸檢測試紙對產物進行檢測，全部過程只需30min，可檢出10個拷貝數的病毒基因組DNA，陽性檢出率高於螢光定量PCR，真正實現了塘邊檢測。

重組酶聚合酶擴增技術是Piepenburg等於2006年首先提出的一種新型的核酸恆溫擴增技術，主要依賴於重組酶、單鏈DNA結合蛋白和鏈置換DNA聚合酶這三種酶，最適反應溫度在37-42℃之間，無需複雜的樣品前處理和核酸變性，可擴增DNA和RNA，一般可在10分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產物，同時可實現數據的實時讀取和多個模板的同步檢測，被認為是可真正替代PCR的技術。由於該方法是在恆溫下完成核酸的擴增，結合核酸檢測試紙，可在養殖現場推廣使用，具有廣闊的應用前景。&nbsp






來源：水產養殖動物疾病防控技術國家地方聯合工程實驗室
作者：黃冠軍
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