知己知彼,百戰百勝。想要獲得目的蛋白,首先得了解它到底是如何表達的:組成型表達?還是誘導型表達?時空表達譜有什麼特點?
案例分析 1
事件:2019年7月,客戶反饋Proteintech品牌SURVIVIN抗體(貨號:10508-1-AP)做WB實驗檢測小鼠肝臟沒有條帶。
結果:經多篇SCI文獻確認,同時Proteintech 質檢人員復檢確認,SURVIVIN蛋白在正常成年小鼠肝臟中基本不表達。
案例分析 2
事件:2018年5月,客戶反饋Proteintech品牌IDO1抗體(貨號:13268-1-AP)做WB實驗檢測Hela細胞沒有條帶。
結果:經查閱文獻資料,同時Proteintech質檢人員復檢確認,HeLa細胞中IDO1蛋白需要在IFN-γ的刺激下,才會有較高水平表達。
知識點: 實驗前,可通過調查相關文獻以及網站,查看靶標蛋白的時空表達情況,確保實驗方案正確。常用的蛋白資料庫有:
UniProt(https://www.uniprot.org/),一個十分強大的蛋白資料庫,可了解靶標蛋白基因信息、別稱、功能、可變剪切、定位及可修飾類型等;
HPA(http://www.proteinatlas.org/),The Human Protein Atlas,簡稱HPA資料庫,主要通過免疫組化技術確定人體組織和細胞中的蛋白表達水平和分布;
BioGPS(http://biogps.org/),一個基因&蛋白信息資料庫,可通過基因的mRNA表達水平參考不同樣本中靶標蛋白的表達水平。
Expasy(https://www.expasy.org/)一個蛋白質在線分析平臺,可根據蛋白序列信息預測其分子量、等電點、親/疏水性等相關信息。
另外,Paxdb資料庫,NCBI綜合資料庫、UniHI蛋白互作資料庫等同樣也可在線分析靶標蛋白相關信息。