第二節 寄生蟲人工培養

2021-01-17 生物谷

第二節 寄生蟲人工培養

  本書僅介紹三種原蟲的人工培養。

  一、溶組織內阿米巴培養。

  1.營養瓊脂雙相培養基

  ⑴固體部分:牛肉浸膏3g;蛋白腖5g;瓊脂 15g;液體1000ml(見「液體部分」)。
⑵液體部分:氯化鈉8g;氯化鉀0.2g;氯化鈣0.2g;氯化鎂0.01g;磷酸氫二鈉2g;磷酸二氫鉀0.3g;蒸餾水1000ml。

  製備先配液體部分2000ml,氯化鈣與氯化鎂另裝小瓶,高壓滅菌(壓力6.81公斤20分鐘)後冷卻,合併一起,取1000ml配固體部分,經沸水浴2~3小時,使完全溶解。若有殘渣可用4層紗布過濾除去,趁熱將濾液分裝試管,每管5ml,高壓滅菌,形成斜面,冷卻後放冰箱中備用。接種前,每管加液體部分4.5ml和牛血清0.5ml,並加米粉20mg(用大米粉分裝小管,經180℃烤箱消毒3次)。

  2.洛克氏液雞蛋血清培養基

  ⑴培基成分:洛克氏液70ml;滅活血清(每管加0.5ml);米粉(每管加20mg);雞蛋4個。
⑵洛克氏(Locke)液:氯化鈉9g;氯化鈣0.2g;氯化鉀0.4g;碳酸氫鈉0.2g;葡萄糖(壓力3.63公斤15分鐘)2.5g;蒸餾水1000ml。

  製備先配洛克氏液1000ml,取雞蛋用肥皂水洗刷淨,以70%酒精洗淨後,破殼將蛋黃、蛋清傾入含70ml洛克氏液的小三角燒瓶內,加有玻璃珠,充分搖動使其內含物混合,之後分裝消毒試管內,每管約5ml,置斜位在70℃下經1小時凝固斜面,翌日再置高壓消毒20分鐘。接種前每管加洛克氏液4.5ml、馬血清0.5ml、米粉20mg。

  二、陰道毛滴蟲培養

  常用肝-腖-糖培養基的培養方法。

  1.培養基的配製:15%肝浸液100ml;蛋白腖2g;葡萄糖0.5g。

  將以上成分混合,加熱使溶,經濾紙過濾,調節pH至5.5~6.0。每管分裝5ml,8磅20分鐘高壓滅菌,冷卻後,置37℃恆溫箱中24小時,證明無菌後,貯存於冰箱備用。接種前每管加滅能無菌馬血清1ml,即可用。

  15%肝浸液的製備:取牛或兔肝15g,洗淨,剪碎如小米粒大小,浸入100ml,蒸餾水中,置冰箱過夜,次日煮沸半小時,用4層紗布過濾除去渣滓,補充蒸餾水至100ml,即成15%肝浸液。

  2.培養方法①以無菌棉拭從陰道後穹窿處取分泌物,無菌接種入上述的培養基中;②初次接種和第1、2次轉種時,應加青黴素5~10萬單位/2ml培基;③培養溫度為35~38℃為宜;④pH在5.4~6.8之間。

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