第三節 寄生蟲實驗動物保種

2020-11-25 生物谷

第三節　寄生蟲實驗動物保種

　　寄生蟲的動物保種，是將其感染期接種於實驗動物，使蟲體在動物體內存活，以利於寄生蟲與寄生蟲病的研究、寄生蟲病診斷以及製備教學標本等。

　　一、杜氏利什曼原蟲無鞭毛體

　　取患者的前述組織穿刺物，用適量生理鹽水稀釋後，注射于田鼠（或金黃地鼠）腹腔內，每隻鼠注射0.5ml，放籠內飼養。一個月後殺死田鼠，取其肝、脾組織作塗片，染色，鏡檢。轉種時將感染利肝曼原蟲的田鼠解剖，取其肝、脾置於消毒的組織研磨器中或研缽中，加入少量生理鹽水研磨為勻漿後，再加適量生理鹽水稀釋，用消毒注射器吸取稀釋液注射健康田鼠腹腔內，每隻鼠注入0.2～0.5ml，繼續飼養。3～4周後，按前述方法進行檢查。原蟲在動物體內可生存數月。

　　二、剛地弓形蟲

　　經穿刺抽取病人的腦脊液0.5～1ml，注射於體重18～25g的健康小白鼠腹腔內。3周後抽取小白鼠腹腔液作塗片檢查（查滋養體）。如為陰性再取肝、脾、腦組織研磨為勻漿，按1:10量加入無菌生理鹽水稀釋，進行第二次接種。如仍為陰性可用同法進行2～3次，再觀察結果。陽性者可作接種傳代，每2周一次，以保種。

　　接種小鼠，每隻注射0.3～0.5ml的勻漿。感染後每天觀察，即抽取腹腔液塗片，染色後觀察。一般感染第四天可見到弓形蟲滋養體。

　　抽取病鼠腹腔液方法，是在其腹部作一切口，用鑷子夾提腹部的皮膚和腹膜，用1ml注射器吸取1ml生理鹽水，迅速注入腹腔，輕揉腹壁，使生理鹽水和腹腔液混勻，然後再抽出腹腔液檢查。

　　三、旋毛蟲

　　將感染旋毛蟲的小白鼠（或大白鼠）殺死，剝皮，取其肌肉；也可取含有幼蟲的豬肉，剪成米粒大小，取1小塊肉置在載玻片上壓片檢查，以含有100～200個幼蟲囊包量的肌肉，經口餵健康小白鼠，餵前應飢餓小鼠24小時；或將含有幼蟲囊包的肌肉剪碎，置於含有消化液的三角瓶內，一般每1g肌肉加入60ml的消化液，置37～40℃溫箱中，經10～18小時（此間經常搖動燒瓶或攪拌），去掉上層液，然後以水洗沉澱法或離心沉澱法收集幼蟲。以生理鹽水洗滌2～3次，用1ml的注射器和8號針頭吸取100～200條幼蟲，經腹腔注射或餵飼健康小白鼠（或大白鼠）。感染第5周後，可在鼠肌中（以膈肌、腿部肌多見）可找到幼蟲囊包。幼蟲在動物體內可生存3個月或半年。

　　四、血吸蟲

　　1.實驗動物一般用18～22g體重的健康小白鼠或2～4kg家兔。
2.尾蚴逸出將陽性釘螺2～3隻放入指管（1×7cm）中、加入去氯水或冷開水至管口，管口蓋以銅絲網，以防釘螺爬出。置25℃孵育4～12小時，尾蚴可陸續逸出浮於水面。
3.感染動物將小白鼠或家兔仰臥固定在木板上，剪去腹毛，範圍約5×5cm約1～2張蓋片大小），用清水洗淨腹部皮膚。用白金耳沾取液面的尾蚴置於蓋玻片上，在解剖鏡下計算尾蚴數量。通常感染小白鼠每隻50條尾蚴，家兔500～800條即可。將含已計數尾蚴的蓋片，翻轉覆蓋在動物腹部的去毛處，使其與皮膚接觸，同時在蓋片與皮膚之間滴加少許清水，以保持溼潤；冬季應保持溫度在25℃左右，15～20分鐘後取下蓋片。感染後約40～45天，即能在動物糞便中查到蟲卵。操作中應防止感染，用過器材應消毒。

　　五、華支睪吸蟲

　　常用實驗動物有貓、犬、豚鼠、大白鼠、兔等。取含有華支睪吸蟲囊蚴的魚肉，用人工消化液消化後收集純淨的囊蚴。將囊蚴拌入飼料餵食或直接從口內插入橡皮管注入胃內。感染囊蚴的數量，因動物大小而異，以200～400個為宜。感染後一個月，即可自糞便內檢獲蟲卵。

　　六、衛氏並殖吸蟲

　　常用實驗動物有犬、貓。將感染該種吸蟲囊蚴的溪蟹或蝲蛄，放入清水中洗淨後，用研缽或絞肉機搗碎，經篩過濾去除粗殼渣，以沉澱法反覆清洗至水清。吸出沉渣放在雙筒解剖鏡下檢查，用滴管吸取囊蚴並計數，將定量囊蚴拌入飼料餵動物。也可將囊蚴放入含有2%膽酸鹽溶液中，置40℃1小時，使後尾蚴脫囊。用無菌生理鹽水洗滌後，給貓或犬進行腹腔注射。幼蟲數量以100～300個為宜。約2個月後可在糞便中檢出蟲卵。

　　註：人工消化液配方

　　鹽酸　0.4ml
胃蛋白酶 25g
蒸餾水100ml  

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