史上最全質粒圖譜及看法,值得收藏!

2021-02-26 解螺旋

Step 1:先了解質粒的基本組成元素,Ori複製起始點、抗性基因有哪些、多克隆位點在哪裡,有哪些酶切位點?有哪些螢光標記或蛋白標籤序列?



Step 2:看質粒是否是表達載體,如果是,那就必定有這些原件:啟動子-核糖體結合位點-克隆位點-轉錄終止信號。


Step 3:弄清楚方向。為什麼質粒圖譜上有的箭頭順時針有的箭頭逆時針?那其實是代表兩條 DNA 鏈,即質粒是環狀雙鏈 DNA,它的啟動子等在其中一條鏈上,而它的某些基因在另一條鏈上。當然,最重要的是要弄清楚目的基因插入那一段(從T7啟動子到終止子那一段)的方向,即下圖黃色圈圈所示的箭頭方向,其它的大可以忽略。



pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(+),構建表達載體常用思密達~


強大的pEGFP質粒家族,構建具有綠色螢光的融合蛋白,麥子的摯愛~


pUC19常用於DNA片段克隆、DNA測序、外源基因表達等


帶DYKDDDDKtag的pCMV-C/N質粒及其多克隆位點


pAAV-IRES-hrGFP腺病毒相關載體


·······

pET質粒系列該系列是大腸桿菌克隆表達重組蛋白很強大的系統,目的基因被克隆到pET質粒載體上,受噬菌體T7強轉錄及翻譯調控,宿主細胞提供的T7RNA聚合酶誘導其表達。

pLVX-IRES-ZsGreen1及其克隆位點,哺乳動物細胞慢病毒表達載體,載體能夠同時表達ZsGreen1螢光蛋白和目的基因

腺病毒穿梭質粒pShuttle系列


pDsRED1-C1: C代表在DsRed1的C段插入序列構建融合蛋白

pDsRED1-C1: C代表在DsRed1的N段插入序列構建融合蛋白

DsRed蛋白單體突變的載體,pDsRED系列載體,屬於螢光蛋白報告載體


pLazl質粒,可以提供lac阻遏蛋白

質粒pLysS&E,具有氯黴素抗性。此質粒含有表達T7 溶菌酶的基因。

pSCREEN-1b(+)質粒,也含有表達T7 溶菌酶的基因


pMAL-p5X:大腸桿菌(E.coli)表達載體,用於蛋白表達與純化

pGEX載體系列,特點就是帶有GST標籤,可以增加目的蛋白的溶解度

p3XFLAG-Myc-CMV質粒,For transient expression and secretion of dual tagged (N-terminal 3XFLAG™, C-terminal c-myc) fusion proteins.

即雙重標記瞬時表達和分泌,N端 3XFLAG標記,C端c-myc標記,一看這質粒就知道逼格高、價格較貴~

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