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作者:解螺旋.毛博
轉載請註明來源:解螺旋,醫生科研助手
培養液是人工模擬細胞體內生長的生存環境,對於細胞培養起著關鍵性作用。在這方面,毛博走了彎路之後得到一些寶貴的經驗和教訓,都是來自實戰第一線的乾貨,字字血聲聲淚,先貢獻給大家。
選擇培養基沒有一定的標準,某種培養基可以適合多種細胞,某種細胞也可以在不同培養液中生長。但是,建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞首選的培養基。可以查閱參考文獻,或在購買細胞株時諮詢。例如,小鼠細胞株多選1640;進行細胞雜交,基因轉移實驗,可選擇IMDM。 另外,本實驗室用慣了的培養基不妨一試。這些都是師兄師姐們用了幾十年了。肯定好用的。
1640的確是非常便宜的培養基,也很好用。所以在國內的實驗室中,用的非常非常多。但是,它的緩衝力最弱,所以有時會對細胞的生長狀態有影響,尤其是一些實驗室長期傳代狀態不好的細胞。所以,毛博很敗家地推薦:為了早點出文章,有條件還是用DMEM,當然不是昂貴的GIBCO公司的,實在是太貴了。HYCLONE的砍砍價,乾粉很便宜,但是明顯雜質和質量不如GIBCO。一分價錢一分貨。真的是真理哈。
一旦在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,應該在2到3周內用完它。因為,一些抗生素和血清中的基本成分在解凍後就開始降解。2-3周後就降解完了。所以,一次少配一點,就不要偷懶了。
培養基的pH值隨著碳酸氫鈉量的增加,呈拋物線增長,當碳酸氫鈉加到一定量時,pH變化越來越小。而培養基的滲透壓值隨著碳酸氫鈉量的增加,呈直線增長,碳酸氫鈉量越大,滲培養基變成了高滲溶液,細胞會脫水萎縮滴。
必須貯存於–20 ~ -70℃,若存放於4℃,如同第三條所說的,2~3周就降解了。教大家一個小竅門:可將1瓶500ml的血清,每次40~45 ml 分裝於無菌50 ml 離心管中,由於血清結凍時體積會增加約10 %, 必須預留此膨脹體積5~10ml,否則會把離心管凍裂滴。
血清的解凍和細胞的解凍正相反:細胞是越快越好;血清是越慢越好。血清解凍步驟: -20℃或–70℃冰箱拿出來,放到4℃冰箱,放一天。在這一天中,時不時地去搖晃一下,使溫度與成分均一,減少沉澱的發生。一天過後,拿出來放到室溫下,等血清恢復室溫了,再分裝。
掌握一條原則:除非必須,一般不要熱滅活,因為會造成沉澱物顯著增多,且會影響血清的品質。這些沉澱物在顯微鏡下觀察,像是「小黑點」,常常誤以為是血清遭受汙染,又去過濾呀什麼的,無端增加沒有必要的工作量。這裡毛博提醒大家:一般不要熱滅活。
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