保衛細胞寶寶離不開細胞培養的四大護法
2020-12-01 儀器信息網
隔壁的直男師兄今年喜得千金，最近總在實驗室詭異地傻笑，問他為何，說是時常想起女兒的可愛模樣。
這種感情，沒養育過孩子的人恐怕理解不了。但生物汪在實驗室養育細胞，也一樣寄託感情，生怕細胞被養壞了。一個閃失，就前功盡棄。實驗結果不可靠，沒有一致性和穩定性，還重複不出來，再濃密的頭髮也經不住這樣的考驗。所以，有一個穩定、一致的培養環境，那就很重要了。
培養細胞不可能24小時值守，快快請出四大護法相助！
1. 大護法：二甲基亞碸（DMSO）
成功凍存和復甦細胞是細胞培養研究的常規操作。細胞低溫儲藏時，防止冰晶形成是維持細胞活力的關鍵。大護法DMSO作為冷凍保護玻璃化劑，可以讓細胞免受冰晶導致的機械損傷。大護法法力無邊，能夠用於原代、繼代培養和重組的異倍體和雜交瘤細胞系、胚胎幹細胞 (ESC) 以及造血幹細胞的凍存。
下面為大家解密DMSO這個既熟悉又陌生的細胞培養大護法～～
l DMSO的摩爾濃度是多少？
DMSO的摩爾濃度為14.1 M，依據是密度1.1 g/mL和分子量78.13 g/ml。
l DMSO的來源？
過去，DMSO是從樹皮中分離出來的。現在，它是一種商業合成的溶劑。
l 細胞凍存培養基中應使用什麼濃度的DMSO？
DMSO通常以1-10％的濃度使用，具體取決於細胞系。
l DMSO應該是液體，為什麼我收到後卻是固體？
DMSO的熔點為16-19℃，室溫過低就凝固。這並不妨礙使用，可以緩慢加熱令其重新液化，不會有任何影響。
l 哪種類型的過濾器可用於無菌過濾DMSO？
DMSO可以用帶0.2 μm PTFE膜的過濾器進行無菌過濾。
每個伺候細胞寶寶的「寶爸寶媽」對棕瓶子白蓋子的DMSO應該都不陌生。沒錯！正是Sigma-Aldrich®品牌熱賣的這款DMSO（貨號：D2650）：明星產品，質量過硬，口碑積累，適用性廣，久經驗證。
2. 二護法：血清
血清裡的生長因子能促進細胞的繁殖，附著因子可促進細胞的貼壁，此外礦物質、脂類及激素對細胞也大有裨益。常用的血清有胎牛血清和小牛血清，公認澳洲來源的血清品質更優、更安全。
趕快來了解一下保護細胞寶寶的二護法吧～～
l 如何解凍血清？
血清應在2-8°C過夜解凍以避免降解，或者在室溫條件下，定期輕輕搖動使組分重懸。解凍的血清在加入細胞培養基前應該混合均勻。反覆凍存會嚴重影響血清品質，建議將解凍的血清分裝成單次使用量，並凍存於-20°C。如果儲存於2-8°C的環境中，應該在2-4周內儘快使用。溫度超過37°C時血清會降解，功能遭到破壞。
l 如果血清收到時存在部分解凍，還能繼續使用嗎？
血清是乾冰包裝運輸，到達時應該是冷凍狀態。運輸超期，會部分解凍，但依然可以繼續使用。
l 培養基中加入血清和所有補充物後可以儲存多久？
如果正確無菌操作，添加血清的培養基可以在2-8°C最長儲存6周。不論儲存時間長短，一旦培養基變渾濁，應該使用適當的方法丟棄。
l 為什麼血清會出現渾濁或絮狀物質？
原因很多，主要有二：
1. 反覆的凍融會使血清脂蛋白發生變性造成渾濁，所以，一定要分裝哦～～
2. 血清加工中遺留的纖維蛋白原在解凍時會轉化成纖維蛋白，過量的纖維蛋白就呈現為絮狀物。不要著急，可以離心移除；不推薦過濾哦，因為容易堵。
l 什麼是γ輻照的血清？
γ輻照的血清通過暴露於放射性60Co產生的25-40 kGy劑量的γ射線來滅活病毒和其他外來微生物(比如支原體)。γ輻照處理不影響血清的理化性質或細胞培養性能。
l 為什麼有些血清是熱滅活的？如何熱滅活？
哺乳動物血清中天然存在的補體蛋白參與細胞溶解事件、收縮平滑肌、從肥大細胞和血小板中釋放組胺和激活淋巴細胞和髓細胞。熱滅活破壞了血清中補體的活性，因此免疫學應用，培養胚胎幹細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時推薦使用。
熱滅活方法是在56°C水浴中處理30分鐘，並每隔大約10分鐘旋轉一次瓶子。為了保持精確，可使用一個類似大小的瓶子作為對照，對照瓶內放入同等體積的水，並放置一個溫度計，在溫度到達56°C時開始計時30分鐘。熱滅活過程必須小心控制，避免血清中支持細胞和組織繁殖的關鍵蛋白組分發生降解。
l 胎牛血清的顏色和之前使用的批次不同，會影響血清使用效果嗎？
血清的顏色取決於血紅蛋白濃度，顏色差異不影響血清性能。
說了這麼多，從哪裡請到這尊神呢？當然首選默克啦～～澳洲來源的牛血清，滿足培養細胞的不同需要！
貨號 | 產品描述 |
F8318-500ML | 胎牛血清，澳大利亞來源，無菌，適合細胞培養，適合雜交瘤細胞，500mL |
F8687-500ML | 胎牛血清，澳大利亞來源，γ輻照，無菌，適合細胞培養，適合雜交瘤細胞，500mL |
B7446-1000ML | 小牛血清，澳大利亞來源，無菌，適合細胞培養，適合雜交瘤細胞，1000mL |
B7447-1000ML | 小牛血清，澳大利亞來源，γ輻照，無菌，適合細胞培養，適合雜交瘤細胞，1000mL |
3. 三護法：胰蛋白酶
在細胞培養中，從組織上解離或從貼壁基質上分離細胞的步驟很關鍵，一般使用胰蛋白酶。胰蛋白酶作用於賴氨酸或精氨酸的C末端，在37°C時具有最佳的效率，因此使用期前要預熱。當然，高濃度的胰蛋白酶長期孵育會去除細胞表面蛋白而損傷細胞，甚至殺死細胞。看來，這個護法的脾氣可不好哦～～
根據應用和細胞類型的不同，胰蛋白酶的組分和濃度也不同。比如，粘附分子在鈣離子存在時決定細胞-細胞和細胞-基質的相互作用，為了削弱折衷聯繫，通常使用含EDTA的胰蛋白酶螯合二價陽離子（Ca, Mg）（點擊這裡，了解更多：T4049）。
胰蛋白酶的主要來源是豬的胰臟，產品是凍乾粉或溶液。為了避免動物或微生物物質，現在也有技術可以在玉米中重組表達牛胰蛋白酶，厲害吧？(點擊這裡，了解更多：T3449)。
胰蛋白酶的使用濃度也很有講究。對於強貼壁細胞系，常使用0.25%-2.5%的胰蛋白酶。如果實驗需要細胞表面蛋白完整，則應降低使用濃度（0.05%胰蛋白酶）。
4. 四護法：抗生素
細菌寶寶的生存環境這麼好，肯定有壞蛋覬覦，這就需要請出四護法——抗生素。
常見的生物汙染由細菌、真菌和支原體造成，部分由病毒、化學物和細胞交叉汙染造成。抗生素可以控制細胞培養中的生物汙染。靈活使用抗生素是控制汙染的方法，但千萬不要偷懶，還是要注意無菌操作哦～～
青黴素對大多數革蘭氏陽性菌和少數革蘭氏陰性菌有效，鏈黴素對革蘭氏陰性菌和少數革蘭氏陽性菌有效，聯合使用青黴素和鏈黴素（簡稱雙抗），就能有效控制細胞培養中大多數細菌的汙染啦～～
默克旗下有相當靠譜的抗生素。Sigma-Aldrich®品牌熱賣的青鏈黴素溶液（貨號為V900929）不僅性能穩定，超高性價比；而且還是即用型經典配方（10KU青黴素和10mg鏈黴素/mL），直接以1:100比例添加到培養基中就全搞定！
怎麼樣？這四大護法，是不是各個身手不凡呀！有了他們，細胞寶寶就可以健康無憂啦～～
友情提醒，11月起我們會推出四大護法優惠組合套裝，敬請留意~
也歡迎大家在留言區分享自己培養細胞的心得體會～～我們會精選出五個有趣有料的留言，送上默克超可愛的萌娃家族盲盒一個，共有5位幸運兒，快來留言參與吧！
留言截止時間：2020年10月30日12：00
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