MTT 法是 Mosmann 1983 年報導的，以後此方法得到了迅速發展並廣泛應用於臨床與科研研究。其原理是活細胞中脫氫酶能將四唑鹽還原成不溶於水的藍紫色產物（formazan)，並沉澱在細胞中，而死細胞沒有這種功能。二甲亞碸（DMSO）能溶解沉積在細胞中藍紫色結晶物，溶液顏色深淺與所含的 formazan 量成正比。再用酶標儀測定 OD 值。
MTT 法是 Mosmann 1983 年報導的，以後此方法得到了迅速發展並廣泛應用於臨床與科研研究。其原理是活細胞中脫氫酶能將四唑鹽還原成不溶於水的藍紫色產物（formazan)，並沉澱在細胞中，而死細胞沒有這種功能。二甲亞碸（DMSO）能溶解沉積在細胞中藍紫色結晶物，溶液顏色深淺與所含的 formazan 量成正比。再用酶標儀測定 OD 值。
一、實驗前應明確的問題
1. 選擇適當的細胞接種濃度。一般情況下，96 孔培養板的一內貼壁細胞長滿時約有 105 個細胞。但由於不同細胞貼壁後面積差異很大，因此，在進行 MTT 試驗前，要進行預實驗檢測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數條件下的生長曲線，確定試驗中每孔的接種細胞數和培養時間，以保證培養終止致細胞過滿。
2. 藥物濃度的設定。一定要多看文獻，參考別人的結果再定個比較大的範圍先初篩。根據自己初篩的結果縮小濃度和時間範圍再細篩。
3. 時間點的設定。在不同時間點的測定 OD 值，輸入 excel 表，最後得到不同時間點的抑制率變化情況，畫出變化的曲線，曲線什麼時候變得平坦了（到了平臺期）那個時間點應該就是最好的時間點（因為這個時候的細胞增殖抑制表現的最明顯）。
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二、貼壁細胞
1. 收集對數期細胞，調整細胞懸液濃度，每孔加入 100 ul，鋪板使待測細胞調密度至 1 000～10 000 孔，（邊緣孔用無菌 PBS 填充）。
2. 5% CO2，37℃ 孵育，至細胞單層鋪滿孔底（96 孔平底板），加入濃度梯度的藥物，原則上，細胞貼壁後即可加藥，或兩小時，或半天時間，但我們常在前一天下午鋪板，次日上午加藥。一般 5～7 個梯度，每孔 100 ul，設 3～5 個復孔。建議設 5 個，否則難以反應真實情況。
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三、懸浮細胞
四、MTT 的配製
五、細胞的接種（鋪板）
1. 吹打時懸液總量不能太多，達到吸管吸液量的 3～4 倍，可能比較容易混勻。10 ml 的離心管裡面最好裝 3～4 ml 的懸液：懸液太少容易吹起很多氣泡，懸液太多又不容易吹成單細胞懸液。
2. 吸管的吸液量最好在 1 ml 左右：吸液量過多的話，一下吸起很多液體，管中所剩就很少，這樣吹打容易起泡，吸液量過少，吹打的力度就不夠，吹打就會不均勻。如果是吸液量 1 ml 多的吸管，總液量在 5 ml 左右為益。
3. 吸的時候要在懸液底部，然後提起來一點，但是吹下去的時候不要離開液面，否則容易吹打出氣泡。
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