MTT原理
MTT全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，漢語化學名為 3-(4，5-mtt二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：mtt噻唑藍。是一種黃顏色的染料。
MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)並沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞碸(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數範圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點：由於MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶於水，需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加，也會對實驗結果的準確性產生影響，而且溶解甲的有機溶劑對實驗者也有損害。
MTT 溶液的配製方法
通常，此法中的MTT 濃度為5mg/ml。因此，可以稱取MTT 0.5克，溶於100 ml的磷酸緩衝液(PBS)或無酚紅的培養基中，用0.22μm濾膜過濾以除去溶液裡的細菌，放4℃ 避光保存即可。在配製和保存的過程中，容器最好用鋁箔紙包住。實驗的時候我一般關閉超淨臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。
需要注意的是，MTT法只能用來檢測細胞相對數和相對活力，但不能測定細胞絕對數。在用酶標儀檢測結果的時候，為了保證實驗結果的線性，MTT 吸光度最好在0-0.7 範圍內。
MTT一般最好現用現配，過濾後4oC避光保存兩周內有效，或配製成5mg/ml保存在-20度長期保存，避免反覆凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分裝在EP管裡，用的時候現配，直接往培養板中加，沒必要一下子配那麼多,尤其當MTT變為灰綠色時就絕對不能再用了。
MTT有致癌性，用的時候小心,有條件最好帶那種透明的簿膜手套.配成的MTT需要無菌，MTT對菌很敏感;往96孔板加時不避光也沒有關係，畢竟時間較短，或者你不放心的時候可以把操作臺上的照明燈關掉.
配製MTT時用PBS(ph=7.4)溶解。PBS配方：Nacl 8g + Kcl 0.2g + Na2HPO4 1.44g + KH2PO4 0.24g調pH 7.4,定容1L。
普通MTT法實驗步驟：
1：接種細胞：用含10% 胎小牛血清 得培養液配成單個細胞懸液，以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul.
2: 培養細胞：同一般培養條件，培養3-5天(可根據試驗目的和要求決定培養時間)。
3：呈色：培養3-5天後，每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS配製，pH=7.4)20ul.繼續孵育4 h，
終止培養，小心吸棄孔內培養上清液，對於懸浮細胞需要離心後再吸棄孔內培養上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10min，使結晶物充分融解。
4：比色：選擇490nm波長，在酶聯免疫監測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪製細胞生長曲線。
藥物MTT法實驗步驟
貼壁細胞：
1: 收集對數期細胞，調整細胞懸液濃度，每孔加入100ul,鋪板使待測細胞調密度 1000-10000 孔，(邊緣孔用無菌PBS填充)。
2: 5%CO2，37℃孵育，至細胞單層鋪滿孔底(96孔平底板),加入濃度梯度的藥物,原則上，細胞貼壁後即可加藥，或兩小時，或半天時間，但我們常在前一天下午鋪板，次日上午加藥.一般5-7個梯度,每孔100ul,設3-5個復孔.建議設5個，否則難以反應真實情況
3: 5%CO2，37℃孵育16-48小時，倒置顯微鏡下觀察。
4: 每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml，即0.5%MTT)，繼續培養4h。若藥物與MTT能夠反應，可先離心後棄去培養液，小心用PBS衝2-3遍後，再加入含MTT的培養液。
5: 終止培養，小心吸去孔內培養液。
6: 每孔加入150ul二甲基亞碸，置搖床上低速振蕩10min，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。
7: 同時設置調零孔(培養基、MTT、二甲基亞碸)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、二甲基亞碸)。