SUNS丨人臍帶間充質幹細胞對HaCaT細胞增殖與遷移的影響

2021-01-21 舜喜再生醫學

探討人臍帶間充質幹細胞（hucMSCs）對人表皮角質形成細胞增殖與遷移的影響及其可能機制。

章毅  陳侃俊  伍婷  張晗  祁成  孔凡瑞  陳亮  胡肖希  李品宙

採用II型膠原酶消化法從新生兒臍帶中分離製備hucMSCs，用流式細胞術鑑定 P3代hucMSCs表面標記抗原，用油紅O染色、茜素紅S染色和Masson染色進行間充質幹細胞三向分化能力鑑定；以人表皮角質細胞系HaCaT為研究模型，在transwell上室接種P3代hucMSCs進行共培養，顯微鏡觀察24、48和72h 時HaCaT的細胞形態，CCK8法檢測細胞增殖狀況，劃痕法檢測細胞12h和24h 遷移率，qRT-PCR法測定HaCaT細胞遷移、增殖相關生長因子KGF-2、FGFR-2、TGF-β1，以及細胞外基質蛋白Fibronectin、MMP-1和CollagenImRNA表達水平。

hucMSCs呈成纖維細胞樣貼壁生長，其表面間充質幹細胞標誌性抗原CD105、CD90、CD73陽性表達率分別為98.35%、99.97%和99.94%，不表達CD45、CD34、CD14和CD19，在誘導培養16d後出現明顯的成脂、成骨和成軟骨細胞特性。hucMSCs共培養24、48和72h，HaCaT細胞存活率較對照組分別顯著增加了（20.42±3.90）%（P=0.002）、（36.30±8.08）%（P=0.001）和（27.31 ±10.04）%（P=0.012），與形態學觀察結果一致。劃痕後繼續培養12h，對照組、共培養組HaCaT的空白區域面積分別為（36354.19±1705.32）μm2、（29497.63±1286.49）μm2（P=0.045），培養24h，其空白區域面積分別減少為（13086.65±1695.85）μm2、（2895.69±224.32）μm2（P=0.014）。qRT-PCR結果顯示，共培養處理24h後hucMSCs組KGF-2、TGF-β1基因表達分別上調為對照組的1.24倍和1.92倍；共培養48h後KGF-2、TGF-β1和FGFR-2分別上調2.01倍、2.26倍和1.34倍，細胞外基質蛋白Fibronectin轉錄水平顯著上調為對照組的1.59倍，MMP-1降低至對照組的0.52倍。

hucMSCs能夠顯著促進 HaCaT細胞的增殖與遷移，這可能與hucMSCs調節 HaCaT增殖、遷移相關生長因子及細胞外基質蛋白的基因表達水平有關，提示 hucMSCs是有潛力的表皮創傷癒合種子細胞。


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