實時螢光定量PCR，簡稱Q-PCR，是一種新的核酸定量技術，是檢測基因表達最靈敏、最可靠的方法。Q-PCR可以檢測同一基因在不同組織中的表達差異、同一基因在不同藥物處理後的表達差異、轉基因食品的檢測等。
實驗前準備：
Trizol抽提試劑、氯仿、異丙醇（4℃貯存）、75%乙醇（DEPC水配製）、DEPC水、一次性槍頭、進口1.5mlEP管、低溫高速離心機（提前4℃預冷）。
RNA抽提（Trizol裂解法）操作步驟：
1、首先，使用無菌EP管收集細胞。
2、然後，2,000g 離心細胞2min。
3、去除細胞離心上清液。
4、加Trizol試劑裂解細胞。
5、漩渦震蕩，勻漿細胞，使細胞懸液呈均一通亮狀，並在室溫下靜置5min。
6、1ml Trizol對應加入200ul氯仿溶液。
7、蓋緊樣品管蓋，用力搖晃15sec。
8、室溫下靜置10-15min。
9、12,000g 4℃離心15min,。
10、小心取出分3層的裂解混合物，其中RNA位於上層液中。
11、小心吸取適量上層液體至乾淨的EP管中。
注意，不要吸到中間白色絮狀物。
12、每毫升Trizol對應加入500ul異丙醇，混勻。
13、室溫靜置10min。
14、12,000g 4℃離心10min。
離心前，RNA沉澱通常不可見，離心後，會形成一片膠白色狀沉澱，並附於EP管管底。
15、棄去上清，加入1ml 75%的乙醇。
16、搖晃混勻，洗滌沉澱。
17、7,500g 4℃離心5min。
18、棄去上清，離心5min。
19、用10ul白色槍頭棄去殘留乙醇。
20、打開蓋子，在室溫下自然晾乾。
21、加適量DEPC水，溶解沉澱，55℃水浴，然後進行RNA定量、反轉或-80℃凍存。
下期我們將為您推送實驗操作視頻系列之實時螢光定量PCR實驗（下），反轉錄和上機檢測，敬請期待！實時螢光定量PCR，簡稱Q-PCR，是一種新的核酸定量技術，是檢測基因表達最靈敏、最可靠的方法。