培養乳鼠心肌細胞的缺氧/復氧(A/R)損傷模型和缺氧預處理(APC)模型

2020-11-22 生物谷
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培養乳鼠心肌細胞的缺氧/復氧(A/R)損傷模型和缺氧預處理(APC)模型

來源：丁香園論壇 2007-01-20 20:25

原代心肌細胞培養及APC模型的製作參照先前報導的方法[2]。即取出生後1－2 d乳鼠心尖部組織, 胰酶消化, 離心後用含20%小牛血清的DMEM培養基製成細胞懸液, 過濾, 按差速貼壁分離法純化心肌細胞, 以1×105 cells/cm2接種於24孔板, 每24 h更換培養液。貼壁生長2 d, 於實驗前24 h更換為無血清DMEM培養基, 隨機分組, 每組雙平行孔, 重複4次操作。缺氧/復氧(anoxia/reoxygention, A/R)模型的製作: 首先將培養基用N2在密閉容器中平衡1 h以上製成無氧培養基, 將培養孔中含氧培養基吸出後加入無氧培養基, 隨後將培養板置於含5% CO2-95% N2 (V/V)混合氣體的密閉容器中(37℃)進行缺氧孵育10 h, 此為缺氧操作, 然後更換為與O2平衡的培養基, 放回培養箱, 復氧孵育1 h。APC模型的製作: 預先給予1次2 h缺氧孵育, 24 h後按A/R操作。

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